198485. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6- és 9-helyzetben helyettesített 2-amino-purinok, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 198485 B 2 etil-amin, különböző propil- vagy butil-aminok, vagy pedig alkálifém-hidroxidok vagy -karbonátok,mint nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, nátrium-karbonát, kálium-katbonát vizes vagy alkoholos (metanolos vagy etalonos) oldatban történő alkalmazásával elszappanosfthatók; ezt a reakciót általában 0-100 "C, előnyösen 20-50 °C hőmérsékleten folytathatjuk le. A (15) - (19) általános képlett! vegyületek az A) - C) eljárásokkal történő előállításuk során legtöbbnyire a purin-7- és -9-izomerek külömbözö mennyiségi arányú elegyei alakjában keletkeznek; ezek az izomerek adott esetben frakcionált kristályosítás útján választhatók szét Az izomer-szétválasztás azonban előnyösen oszlop-kromatográfiai módszerrel, például szilikagél-oszlopon történhet.Az izomerek jellemzése és mennyiségi arányuk meghatárorozása például nagynyomású folyadék-kromatográfiával történhet, i-chrosorb Si 60/5 mm adszorbens (a Merck cég, Darmstadt, NSZK) alkalmazásával. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek, amennyiben Y helyén kénatomot tartalmaznak és R2 és R4 egymástól különböző jelentésilek, az éter-oldallánc 2-helyzetű szénatomján optikailag aktív (királis) centrumot tartalmaznak.Az ilyen vegyületeket racemátok (DL-alak) alakjában kapjuk. Az optikailag aktív antipodok (enantiomerek) kívánt esetben szétválaszthattak, illetőleg ezek a vegyületek ilyen alakokban is előállíthatok. A találmány szerinti eljárással előállítható (1) általános képletű vegyületek értékes farmakológiai tulajdonságokat mutatnak. Ezek a vegyületek in vitro és in vivo hatásoksak különféle vírusok ellen és így alkalmazhatók különböző vírusok, mint DNS-vírusok által okozott betegségek, mint herpesz, pl TVpus symplex 1 és 2, valamint citomegália, továbbá RNS- vírusok, pl. retrovírusok által kiváltott megbetegedések, valamint autoimmun-betegségek és rákos megbetegedések gyógykezelésére. A találmány szerinti vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszeikészítmények enterális (orális), parenterális (intravénás) vagy rektális úton, vagy pedig lokálisan (helyileg) alkalmazhatók. Ezek a gyógyszerek, oldatok, porok, tabletták, kapszulák (beleértve a mikrokapszulákat is), kenőcsök (krémek vagy gélek) vagy végbélkúpok alakjában készíthetők. Segédanyagként a szokásos gyógyszerészeti folyékony vagy szilárd vivőanyagok és hígítószerek, oldószerek, emulgeátorok, simitószerek, ízjavító adalékok, színezékek és/vagy pufferanyagok alkalmazhatók. A gyógyszerek célszerű adagolása (a hatóanyagra számítva) 0,1 - 10 mg/kg, előnyösen 0,2 - 8 mg/kg test-tömeg lehet. A gyógyszerkészítményeket célszerűen olyan adagolási egységek alakjában alkalmazzuk, amelyik a találmány szerinti hatóanyag hatásos napi adagját (például 30-300 mg, előnyösen 50-250 mg) tartalmazzák. A találmány szerinti eljárással előállítható vegyületek különböző más vírus-ellenes szerekkel és immun-stimulátorokkal, pl. interferonokkal kombináltan is alkalmazhatók a gyógyászatban. A találmány szerinti vegyületek hatásossága az alábbi kísérletek szerint vizsgálható: A) In vitro kísérletek: Mikrotiter-lemezeket sejt-kulturákkal, például Heia- és Vero-sejtek kultúrájával beoltunk és vímssal, például Herpes simplex 1 vírussal fertőzzük. 2 órával a fertőzés után a vizsgálandó vegyületet rávisszük különböző hígításokban a fenti fertőzött sejtkulturákra. 48--72 órával a fertőzés után mikroszkópos úton vizsgáljuk a citopatogén hatást és ezt neutrál-vörös felvétel után fotometriai úton is meghatározzuk. B) In vivo kísérletek: Körülbelül 15 g test-tömegű,specifikusan patogénmentes NMRI-egereket intraperitoneális úton simpex 1 vírussal fertőzünk, majd a vizsgálandó vegyülettel intraperitoenális úton kezeljük a fertőzött állatokat. Összehasonlításul minden esetben Acyclovir (ACV) szolgált. A kezelést 5 napon keresztül, naponta kétszer végeztük. A kezelés eredményét a betegség lefolyása és a túlélési arány alapján értékeltük, a gyógyszerrel nem kezelt, fertőzött kontroli-állathoz viszonyítva. Ez utóbbiak a vizsgált vegyület helyett vízben oldható metil-hidroxi-etil-cellulóz oldattal (viszkozitás 300 Pa.s 2 %-os oldatban; (R) Tylose MH 300 P ) lettek kezelve. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek kemoterápiás hatásának meghatározására végzett kísérletek eredményeit a példák utáni 1. táblázatban foglaltuk össze. A találmány szerinti eljárás közelebbi részleteit az alábbi példák szemléltetik. /. példa \) 9-( 1 -klór-metil-2-acetoxi-etoxi-metil)-guanin (6. sz. vegyület) 36,73 g (0,1 mól) 2,6,9-trisz-(trimetil-szilil)-guanint (nyers termék, a 4 287 188 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint előállítva) 100 ml toluolban oldunk, az oldathoz 20 ml trietil-amit adunk, majd 22,0 g (0,1 mól + 10 % felesleg) l-klór-2-(klór-metoxi)-3-acetoxi-propán kevés toluollal készített oldatát adjuk keverés közben,szobahőmérsékleten, nitrogén védőgáz-atmoszférában cseppenként az elegyhez. A reakcióegylet ezután keverés közben, nitrogén-atmoszférában 20 óra hosszat melegítjük 90 *C hőmérsékleten. A toluol elpárologtatósa után a maradékot 500 ml metanolban oldjuk és az oldatot 30 percig forraljuk visszafolyatás közben. Ezután az oldathoz aktivszenet adunk és melegen, leszivatással szűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot vízből kétszer átkristályosítjuk. Ily módon 16 g cím szerinti vegyületet (az elméleti hozam 50 %-a) kapunk, 166 °C-on olvadó fehér kristályok alakjában. B) 9-(l-klór-metil-2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin (2. sz. vegyület) 31,55 g (0,1 mól) fenti módon előállított 9-(lklór-metil-2-acetoxi-metil)-guanint hozzáadunk 500 ml cseppfolyós ammónia 500 ml metalonnal készített oldatához. A kapott oldatot szobahőmérsékleten 12 óra hosszat keverjük, majd némi aktívszén hozzáadása után leszívatással szűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot kevés vízből kétszer átkristályosítjuk. Ily módon 19 g (az elméleti hozam 70 %-a) cím szerinti vegyületet kapunk, 178 *C-on olvadó fehér kristályok alapján. A fenti példákban alkalmazott kiindulási vegyületek előállítása: C) l-klór-2-(klór-metoxi)-3-acetoxi-propán 15,25 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
