198229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 antibiotikum komplex termelésének fokozására, valamint a komplexben egyes komponensek arányának szelektív növelésére
7 HU 198229 B 8 feleló prekurzor mellett vajsavat vagy annak valamely származékát vagy prekurzorát alkalmazzuk, akkor a .mellett' kifejezés azt jelenti, hogy a szóbanforgó anyagokat vagy egyidejűleg adjuk a közeghez, vagy egymás után (tetszőleges sorrendben), de olyan rövid időn belül, hogy a fermentációra együttesen fejthessék ki hatásukat. Nyilvánvaló, hogy ez a definíció olyan esetekre is érvényes, mikor mindkét anyagot előzetesen adtuk hozzá a tenyészethez, vagy abban már eleve jelen vannak. A fentemlltett vajsav-származékot általában olyan mennyiségben alkalmazzuk, hogy a fermentációs közegben a sav koncentrációja 0. 5-2 g/1 legyen. Az antibiotikum komplex termelése általában jelentős mértékben megnövekszik, és ha megfelelő prekurzort is adunk hozzá, akkor az adott faktor aránya elérheti a 95- -98X-ot is. Az A/16686 antibiotikum A2 faktorénak előállításéhoz különösen előnyös, nagy kihozatalt és tisztaságot biztosít az az eljárás, mely abból áll, hogy egy A/16686-ot termelő tenyészethez a fermentáció során leucint - előnyösen L-leucint - és tributirint vagy etil-butirátot adunk. Az alábbi példában részletesebben ismertetjük a találmány szerinti eljárás egyes megvalósítási módjait. 1. példa Rézsútos felületű zabliszt-agar táptalajon tenyésztett Actinoplanes sp 33076 törzszsel beoltunk egy 500 ml-es lombikot, mely 100 ml-t tartalmaz az alábbi összetételű szaporító közegből: szójababliszt 13 g/1 glükóz 12 g/1 keményítő 13 g/1 kalcium-karbonát 4 g/1 A lombikot 28-30 °C-os hőmérsékleten 36 órára forgó rázógépbe tesszük, majd a tartalmából 5-5 ml-t beoltunk olyan 500 ml-es lombikokba, melyek egyenként 100 ml-t tartalmaznak az alábbi összetételű fermentációs közegből: szójababliszt 30 g/1 glicerin 20 g/1 keményítő 4 g/1 glükóz 4 g/1 maltóz 20 g/1 szacharóz 20 g/1 kalcium-karbonát 6 g/1 A tenyésztést 28--30 °C-on 24 órán ét forgó rázógépben folytatjuk, majd hozzáadjuk a megfelelő prekurzort. A tenyésztést további 90-96 órán át folytatjuk, majd a fermentiszapot centrifugélással eltávolítjuk, és az alábbi nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel meghatározzuk, hogy a férmentié mennyit tartalmaz az A/16686 antibiotikum egyes faktoraiból. a. Elválasztás a fordított fázismegoszlási gradiens alapján Felszerelés: Varian 5000 A szivattyú Varian detektor 254 mikrométer Rheodyne 7125 tip. injektor Spectra Physics 4000 tip. integrátor Oszlop: szilánozott szilikagél; Brownlee Lab. RP 18 Spheri 5 Mozgó fázis: 0,05 M nátrium-dihidrogén-foszfát-oldat és acetonitril 65 : 35 arányú elegye, pH = 6 Áramlási sebesség. 1,8 ml/perc Beinjektált mennyiség. 20 mikroliter A mérést izkroatikus körülmények között végezzük. Retenciós idők: A/16686 Ai faktor 6,69 perc A/16686 A2 faktor 10,16 perc A/16686 A3 faktor 16,29 perc b. Százalékos megoszlás Az egyes komponenseket a fent leírt módon elválasztjuk, majd a terület-százalékos módszerrel meghatározzuk a három csúcs összegéhez viszonyított arányukat. A kísérleti eredmények az alábbi táblázatban láthatók: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 6
