198229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 antibiotikum komplex termelésének fokozására, valamint a komplexben egyes komponensek arányának szelektív növelésére
3 HU 198229 B 4 ben - előnyösen ásványi savak, mint pl. a sósav, de bizonyos esetekben szerves savak is lehetnek jelen. A fentiek szerint megfelelő prekurzorként használhatók az olyan, kis szénatomszáraú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterek, melyeket 1-6 szénatomszámú, molekulánként 1, 2, 3, 4, 5 vagy 6 hidroxicsoportot tartalmazó alkanolokkal állítunk elő. Ha 1-4 szénatomszámú alkanolokat használunk, ezek nem lehetnek azonosak azokkal az alkanolokkal, melyek más faktorok prekurzoraiként működnek (pl. izobutanol vagy izoamil-alkohol), hacsak nem az a célunk, hogy mindkét faktor termelését egyidejűleg növeljük. Előnyösen alkalmazható polihidroxi-alkanolok pl. a glicerin és a propilénglikol. Ha a kis szénatomszámú alkanolok különböző enantiomer vagy epimer formákban lehetnek jelen, a leírásban és az igénypontokban mondottak mindegyik formára külön-külön és a különböző formák tetszőleges arányú keverékére egyaránt érvényesek. A mikroorganizmusokra nem mérgező, hidroxicsoportot tartalmazó észter-tipusú prekurzorok olyan 2-22 szénatomszámú alkanoil-észterek, melyekben az alkanoil molekularész olyan típusú, és a fermentációs közegben olyan koncentrációban van jelen, hogy az sem a mikroorganizmus-tenyészet növekedését, sem pedig a kivánt antibiotikum termelését nem gátolja számottevő mértékben. Általában előnyösen alkalmazhatók a 2-4 szénatomszámú, egyenes láncú savak. Az A/16686 antibiotikumot termelő tenyészet az Actinoplanes sp. ATCC 33076 törzs vagy annak olyan termelő mutánsa vagy variánsa, mely a tenyésztés során kinyerhető mennyiségű A/16686 antibiotikumot termel. A találmány szerinti eljárásban az A/16686 antibiotikumot termelő törzset általában az Actinoplanes, speciálisan pedig az A/16686-ot termelő törzseknél (ld. a fent idézett 4,303,646 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást) szokásos körülmények között, olyan vizes tápközegben tenyésztjük, mely az emészthető szén és az emészthető nitrogén forráséul szolgáló anyagokat, valamint szervetlen sókat tartalmaz, és a megfelelő prekurzor hatásos mennyiségének hozzáadásával az A/16686 antibiotikum A2 és/vagy Aa faktorénak termelését szelektive megnöveljük. A megfelelő prekurzort a fermentáció során adagolhatjuk folyamatosan vagy szakaszosan, de hozzáadhatjuk a közeghez a fermentáció előtt is. Az adagolást végezhetjük közvetlenül, ha a prekurzor a fermentáció hőmérsékletén kellőképpen folyékony, vagy pedig oldat, emulzió vagy szuszpenzió - előnyösen vizes oldat vagy szuszpenzió - alakjában. A megfelelő prekurzor .hatásos mennyisége ' a fentiek szerint a prekurzornak azon mennyiségét jelenti, mely a fermentációs közeghez hozzáadva abban a szelektív prekurzornak olyan koncentrációját hozza létre, mely elegendő ahhoz, hogy az A/16686 antibiotikum adott faktorának termelését szelektive megnövelje, ugyanakkor a termelő mikroorganizmus-tenyészetre toxikus hatást nem fejt ki. A prekurzor adagolási sebessége elég nagy legyen ahhoz, hogy a kívánt faktor kihozatalát számottevő vagy optimális mértékben növelje, anélkül azonban, hogy a fermentációra toxikus hatást gyakorolna. Általában előnyös, ha a megfelelő prekurzor hatásos mennyiségét az erjesztés termelő fázisában adagoljuk a közeghez folyamatosan vagy több részletben. A fermentáció után kivánt esetben az A/16686 antibiotikum komplexet vagy különállóan az A2 vagy A3 faktort az ismert eljárásokkal vagy azok kézenfekvő módosításaival nyerhetjük ki. A találmány szerinti eljárásban az A/16686-ot termelő törzs számára alkalmas tápközeg általában a következő komponenseket tartalmazza: valamely alkalmas szén-forrás, ami lehet egyszerű cukor (pl. glükóz, szacharóz, maltóz), poliszacharid (pl. keményítő, dextrán) vagy polialkohol (pl. glicerin, propilénglikol); alkalmas nitrogénforrás, mely lehet pl. valamely ammóniurasó, aszparagin, földimogyoró-liszt, szójababliszt, húskivonat, tripton, pepton, élesztó-hidrolizátum, élesztőkivonat vagy gabonafőzet; szervetlen sók. A tenyésztő közegben jelenlévő sók között vannak közönséges oldható sók, melyekből nátrium-, kálium-, vas-, cink-, kobalt-, magnézium-, kalcium-, ammónium-, klorid-, karbonát-, szulfát-, nitrát-, foszfát- stb. ionok képződnek. Az antibiotikumot termelő törzsből rendszerint lombikban előtenyészetet készítünk, majd ezzel beoltjuk a nagyobb mennyiségű antibiotikum elóállitésára szolgáló tartályokat. Az előtenyésztéshez használt közeg lehet azonos azzal, amit az erjesztő tartályokban alkalmazunk, de lehet attól eltérő is. A fermentációt 50-150 óra alatt, sülylyesztett, aerob körülmények között, 25 és 35 °C közötti, előnyösen 27 és 33 °C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre. A megfelelő prekurzor szelektive hatásos mennyiségét hozzáadhatjuk a fermentációs közeghez a termelő törzzsel történő beoltás előtt, azonban előnyösebb, ha a fermentáció megindulásától számított 24-48 óra elteltével adjuk hozzá. Az adagolást végezhetjük egy vagy több részletben vagy folyamatosan. A találmány egyik tipikus kísérleti megvalósítása során egy rézsútos felületű zabpehely-agar táptalajon tenyésztett, A/16686-ot termelő törzset beoltunk egy 100 ml tenyésztő közeget tartalmazó lombikba. 36 óra múlva e tenyészet 5 ml-es mintáival beoltunk egy sor erjesztő lombikot, melyek egyenként 100 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
