198216. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szialozil koleszterin és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 HU 198216 B 8 letű vegyületet alkalmazunk! s ily módon 35 mg (86%) (V) képletű vegyületet kapunk. A vegyület fizikai tulajdonságai azonosak a 2. példa szerinti vegyület tulajdonságaival. ff. példa Injekciós készítmény előállítása Egy ampullába az alábbi összetételű oldatot töltjük: hatóanyag 2,5 mg nátrium-dihidrogénfoszfát dihidrát 3 mg di-nátrium-hidrogén-foszfát 12HzO 3 mg desztillált vízi ml össztérfogatig 10. példa Felhasználás . előtt feloldandó injekciós készítmény A készítmény előállításánál 0,5 mg hatóanyagot 1 ml fiziológiás sóoldattal összekeverünk, majd a keveréket fagyasztással szárítjuk és egy ampullába töltjük. Az injekciós készítmény feloldásakor 1 ml desztillált vizet adunk az ampullához. 11. példa Készítmény szemben történő alkalmazás céljára Egy ampullába az alábbi összetételű oldatot töltjük: hatóanyag l,mg bórsav 52,5 mg borax 14,5 mg benzalkonikum-klorid megfelelő mennyiségben szolubilizáló oldat 5 ml össztérfogatig 12. példa Inhalációs készítmény A hatóanyagot egy achát dörzscsészében 1-20 m átmérőjű finom porrá dörzsöljük. Ehhez a porhoz laktózt adunk, s a keveréket tovább poritjuk és keverjük. Még további laktózt adunk a keverékhez kis részletekben és tovább keverjük, finomítjuk 20-40-es triturálás eléréséig. A porból 20-40 mg-ot egy kapszulába töltjük vagy ismert módon egy por-papirba hajtogatjuk. A kapszulát poraeroszol céljára használjuk, a hajtogatott papírban lévő port pedig folyékony aeroszol céljára. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológia! hatását az alábbi kísérletekkel bizonyítottuk. 1. kísérlet A neuroblastoma sejt, Neuro 2a törzs szaporodására gyakorolt hatás Neuro 2a sejteket a következő összetételű tápközegre helyeztük: 90% Dulbecco’s Modified Eagle's Midium, 10% magzati borjúszérium (FCS), 100 egység/ml penicillin G, 100 ng/ml streptomycin szulfát. A tenyészetet 37 °C-on inkubáljuk inkubátorban, amelybe 5% szén-dioxidot. vezetünk be. A használt edény egy 60 mm átmérőjű polistirol csésze. Minden csészébe 1-2 ■ 104 neuroblastoma sejtet helyeztünk és 48 óráig tenyésztettük. Az FCS-tartalmú kultúrát eltávolitottuk a kapott sejtkultúrából. A maradék kultúrákhoz, amelyek nem tartalmaztak FCS-t (100% MEM-et tartalmaztak és az antibiotikumok koncentrációja azonos volt az FCS eltávolítás előttivel) adtuk hozzá a vizsgálandó vegyületeket, amelyek a következők voltak: a (IV) képletű vegyület (1. táblázat), az (V) képletű vegyület (2. táblázat), Gál (fil-3) GalNac (fll-4) < < NacNeu-(oC2-3) > Gál (ßl-4) Glc (ßl-l)-Ceramide (a későbbiekben GQib-nek nevezzük) (3. táblázat), és <NAcNeu (oC 2-8) NAcNeu (cC 2-3) > Gál (ß 1-3) GalNAc (ß l/4)-NAcNeu-(oC 2-8) < NAcNeu-(oC 2-3) > Gal (ß 1-4) Glc (ß 1- -1-) Ceramide (a későbbiekben Gqib-nek nevezzük) (4. táblázat), a leirt mennyiségekben és folytattuk a tenyésztést. 24 és 48 óra múlva az élő sejtek száma és a neuritek száma iiiegnövekedett a kultúrában, s mértük a neuritek hosszúságát. A kísérletet minden koncentráció esetében három csészében végeztük. A kapott adatok: átlagértékek V+ standard hiba (S.E.). Eredmények: A (IV) képletű vegyület, GMi és GQib minimális hatásos koncentrációi 48 órával a gyógyszerek hozzáadása után 10 ng/ml, 10 ug/ml és 10 ng/ml volt. Az anyagok molekulasúlyait tekintetbe véve a (IV) képletű vegyület aktivitása 420-szor nagyobb mint a GMi aktivitása és 270-szer nagyobb mint a GQib aktivitása. Az (V) vegyület minimális hatásos koncentrációja 100 ng/ml 48 órával a hatóanyag hozzáadása után és az (V) képletű vegyület 42-szer hatásosabb volt mint a GMi, és 27-szer hatásosabb mint a GQib. Később, a tenyésztést 24 óráig folytatva, a GMi és GQib nem mutatott semmi aktivitást. A (IV) és (V) képletű vegyület aktivitása 24 óra múlva is megmaradt, ha ezeket a vegyületeket 10 ng/ml koncentrációban vizsgáltuk. Az eredmények világosan mutatják, hogy a (IV) és (V) képletű vegyületek erősen hatásosak a neuritek szaporodása szempontjából. Akut toxicitási vizsgálatok Az akut toxicitási vizsgálatokhoz a hatóanyagokat intravénásán adtuk be 45 hetes ddy hím egerekbe. Az eredmények azt mutatják, hogy a (IV) és (V) vegyületek LDso értékei 93 mg/kg és 291 mg/kg, megfelelóleg. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
