198130. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán szérum albumin alapú, izotópdiagnosztikai célokra alkalmas hordozófehérjék előállítására
1 HU 198130 B 2 2. példa A tüdő perfúziós szcintigráfiájára alkalmas, "mTcmai jelezhető makro-aggregált humán szérum albumin preparátum (MAA) előállítása Az adott célra felhasználható preparátummal szemben támasztott követelmények a következők: A preparátum szemcsemérete ne legyen nagyobb 100 pmnél, a "mTc-mal jelzett preparátum jelzési hatásfoka 90%-nál nagyobb legyen, a jelzett preparátummal végzett állatkísérletekben a tüdő/máj aktivitás-arány 10-nél nagyobb legyen. Ezt a preparátumot a következőképpen állítjuk elő: Az 1. példában leírtak szerint kapott, 30 mg/ml humán szérum albumint tartalmazó felülúszóhoz annyi infúziós célokra alakalmas glükózt, injekciós célokra alakalmas aszkorbinsavat és SnCl2 oldatot adunk, hogy az elegy 2 mg/ml humán szérum albumint, 2 pg/ml SnCl2-2H20-t, 20 mg/ml infúziós célokra alkalmas glükózt és 5 mg/ml injekciós célokra alkalmas aszkorbinsavat tartalmazzon. Az oldat pH-ját 0,1 N vizes nátrium-hidroxid oldat és 0,1 N vizes sósavoldat alkalmazásával 5,30-ra állítjuk be. Az oldatot sós jéggel 0 *C-ra hűtjük le, majd 20 perc alatt lassan 20 *C-ra melegítjük. 30 perces várakozás után az oldatot 10 perc alatt 80 ‘C-ra melegítjük fel, majd 5 percig ezen a hőmérsékleten keverjük. A keverés 3. percétől kezdve az oldat opálosodni kezd, ami a fehérje-aggregátumok megjelenését jelzi. A fűtést megszüntetjük, az aggregálást még 5 percig folytatjuk, majd az aggregátumokat tartalmazó oldatból mintát veszünk, és meghatározzuk az össz-szemcseszámot és a részecskék méreteloszlását. A következő értékeket kapjuk: Össz-szemcseszám: 3.100.000±10,0% Részecskeméret-eloszlás: 20-50 pm között 94% 50-70 pm között 5% 20 pm-nél kisebb 1% Az aggregátumokat tartalmazó oldatot 1 ml-es részletekre osztva az 1. példában leírtak szerint fagyasztva szárítjuk. A kapott preparátum "mTc-mal jelezhető; a jelzési hatásfok 95%-nál nagyobb. A készítmény 6 hónapig változás nélkül eltartható. A "mTc-mal jelzett preparátum eloszlását patkány szerveiben a II. táblázatban közöljük. II. táblázat Szerv I. v. dózis %-a az adott szervben 5 perc 1 óra 2 óra 3 óra leheltével Tüdő 88,0 70,6 67,2 65,2 Máj 0,9 0,26 0,34 0,44 Vesék-1,02 1,77 2,32 Lép— Vékonybél-0,32 0,69 2,35 Gyomor-0,08 0,12 Vizelet — 1,32 3.3 4,7 3. példa A máj és a lép szcintigráfiás vizsgálatára alkalmas, 99mTc- mai jelezhető mikro-aggregált humán szérum albumin preparátum (MiAA) előállítása Az adott célokra felhasználható preparátummal szemben támasztott követelmények a következők: A preparátum ne tartalmazzon 5 pm-nél nagyobb és 0,2 pm-nél kisebb részecskéket; a "mTc-mal jelzett preparátum jelzési hatásfoka 90%-nál nagyobb legyen. Ezt a preparátumot a következőképpen állítjuk elő: A 2. példában leírtak szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy a glükózt, aszkorbinsavat és 6n(II)-kloridot is tartalmazó humán szérum albumin oldat pH-ját nem 5,3-ra, hanem 6,0-ra állítjuk be, és a 20 *C-ra felmelegített oldatot 10 perces várakozás után 10 perc alatt nem 80 *C-ra, hanem 91 *C-ra melegítjük fel, állandó keverés közben. A 91 *C-ra felmelegített oldatot 10 percig keverjük, majd a fűtést megszüntetjük, és a keverést még 5 percig folytatjuk. Az aggregált szemcséket tartalmazó oldatot 1 ml-es részletekre osztva az 1. példában leírt módon fagyasztva szárítjuk. A kapott preparátum szemcseméret-eloszlása (elektronmikroszkópos meghatározás szerint) a következő: 0,4 és 2,0 pm között: 100% 0,5 pm-nél kisebb: 4% 0,5 és 1,0 pm között: 65% 1,0 és 2,0 pm között: 25% A preparátum "mTc-mal jelezhető; a jelzési hatásfok 95%- nál nagyobb. A "mTc-mal jelzett preparátum eloszlását patkány szerveiben a III. táblázatban közöljük. ID. táblázat Szerv I. v. dózis %-a az adott szervben 15 perc elteltével Máj 67,o Lép 2,8 Tüdő 1,5 Vesék 1,3 1 ml vér 0,7 Szív 0,8 4. példa Csontvelő szcintigráfiás leképezésére, valamint a nyirokkeringés és a nyirokcsomók leképezésére alkalmas, 99mTc-mal jelezhető nano-aggregált humán szérum albumin preparátum (NAA) előállítása Az adott célokra felhasználható preparátummal szemben támasztott követelmények a következők: A preparátum szemcsemérete nem haladhatja meg a 200 nm-t, a "mTc-mal jelzett preparátum jelzési hatásfoka 90%-nál nagyobb legyen. Ezt a preparátumot a következőképpen állítjuk elő: Az 1. példában leírtak szerint kapott, 30 mg/ml humán szérum albumint tartalmazó felülúszóhoz annyi 1/15 mólos, 7,2 pH-értékű foszfátpuffer-oldatot (Sö-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
