198129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a humán izotópdiagnosztikában alkalmazható, radioaktív izotópokkal jelezhető hordozófehérjék minősítésére
6 HU 198129 A eleve izotópdiagnosztikai célokra alkalmatlannak minősíthetjük. A találmány szerinti eljárást a kővetkező példában részletesebben ismertetjük. 5 Példa Öt különböző forrásból származó, A, B, C, D és E jelű humán szérum albumin 15- 10-15 mg-os részletét 2-2 ml 0,9 tömeg%-os vizes nátrium-klorid oldatban oldjuk, Az oldatok pH-ját 10 mg/ml ón(II)-klorid-dihidrátot tartalmazó 0,1 N vizes sósav-oldattal 3-ra állítjuk be. Ezután, az oldatokhoz 37 MBq 15 (1 mCi) aktivitásnak megfelelő, "“Tc-t tartalmazó nátrium-pertechnetátot adunk 1 ml oldal formájában, és az elegyet 2 percig keverjük. Az igy előállított izotópdiagnosztikai készítmények jelzési hatásfokát ismert mó- 20 dón, szilikagél vékonyrétegen acetonnái kifejlesztve határozzuk meg (a startponton lévő aktivitás a fehérjéhez kötött aktivitást, az Rí, 0,9 és 1,0 közötti aktivitás pedig a fehérjéhez nem kötött aktivitást jelenti). 25 Az izotópdiagnosztikai készítmények 1- 1 ml-es mintáját nyulak fülvénájába injektáljuk, majd az injektálást követő 2, 5, 10, 30, és 60 perc elteltével az állatokból 0,5-0,5 ml térfogatú vérmintát veszünk. A vérmintából elkülönített 5 jul térfogatú vérszérum radioal Livitását szciritillációs módszerrel mérjük. A vérmintából elkülönített másik, ugyancsak 5 ül térfogatú vérszérumot 10 ml 0,01%-os agarózgél és 120 ul anti-HSA kecske IgG felhasználásával készült lemezen, 0,1 mólos barbitál puffer (pH = 8,4) jelenlétében, 6 mA/lemez áramerősség mellett 2 órán át elektroforetizáljuk. Standardként 10, 15, 20, 25 mg/ml humán szérum albumint tartalmazó oldatokat használunk. Az elektroforézis után a lemezeket Coomassie Brillant Blue R250 színezékkel festjük, és a kialakult precipitációs ívek (magasságuk a minta humán szérum albuminkc ncentrációjával arányos) alapján a standardokkal összehasonlítva meghatározzuk a vérminta humán szérum albumin-koncentráoióját. Az így kapott mérési adatok alapján kiszámítjuk a leszakadási indexeket. Az eredményeket az I. táblázatban közöljük. I. táblázat A hordozózófehérje jele Jelzési . hatásfok % 2 pei’c 5 elteltével 10 mért 30 leszakadási 60 index A 83 6 8 12 15 28 B 54 12 19 29 48 83 C 92 9 12 20 31 46.7 D 98 15 22 33 50 61 E 65 2 5 8 10 15 A vizsgált hordozófehérjék közül az E jelű anyag izotópdiagnosztikai célokra alkalmas, az A jelű anyag kisebb érzékenységet 50 igénylő vizsgálatokhoz még felhasználható, míg a B, C és D jelű anyag izotópdiagnosztikai célokra alkalmatlan. 5
