198098. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás penem származékok előállítására
7 198 098 8 elegyhez 25 mg Chromobacterium viscosum eredetű lipáz enzimet adunk, és az elegyet 30 °C hőmérsékleten 4 órán át keverjük. A pH-t 7,0 értéken tartjuk 1 n nátrium-hidroxid adagolásával. A reagáltatás befejeztével a reakcióelegyet 3X100 ml diklór-metánnal extraliáljiik, a szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, majd bepároljuk. így' 94%-os hozammal nyeljük az (5R,6S)-2-hidroxi-etil-6-[l(R)-tetrahidropiranil-oxi-metil]-penem-3-karbonsav-alliI-észíert. H-NMR-spektrum (300 MHz, CHC13) 6 (ppm): l, 3-1,4 (3H, m, CH3CH). 1,45-1,9 (6H m, CH2CH2CH2 THP csoportból), 3,42-3,92(211, m, CH20 THP csoportból), 3,6 (1H széles, OH, 3,8 (1H, m, H-6), 4,05-4,22 (1H, m, H—8), 4,57-4,82 (5H:COOCH2=; CH2OH; CH THP csoportból), 5,2-5,45 (2H m =CH2), 5,61 (1H, m, H—5), 5,85-6,0 (1H, m, CH=). 9. példa 100 ml 0,01 n (pH = 7,5) foszfátpufferben levő 100 mg lipá/.hoz (Chromobacterium eredetű) hozzáadunk 40 g Amberlitcr XAD-7-t. A gyantát éjszakán át szobahőmérsékleten enyhén keverjük. A gyantát kiszűrjük, és 100 ml fenti pufferrel mossuk. A gyantán immobilizált enzimet hozzáadjuk 20 g (5R,6S)-2-butiril-oxi-metil-6-[l(R)-trimetil-szilil-oxietilJ-penem-3-karbonsav-aiiil-észter 20 ml hexánban, és 600 ml 0,01 n (pH = 7,5) foszfátpufferben készült szuszpenziójához. Az elegyet 30 °C hőmérsékleten 4 órán át keverjük. A pH-t 7,50 értéken tartjuk 1 n nátrium-hidroxid adagolásával. A reagáltatás befejezése után az enzimet és a reakcióterméket tartalmazó gyantát üvegszűrőn vákuummal való szűréssel elkülönítjük, majd 3X 300 ml metilén-kloriddal mossuk. A szerves extraktumokat nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. így 91 %-os hozammal 15,2 g terméket nyerünk. A kapott termék *H—NMR spektruma azonos az 1. példa termékére megadottal. A gyantán immobilizált enzimet 3X200 ml fos/fátpufferrel mossuk, majd újabb gyártási ciklusban alkalmazzuk. Az enzim 6 gyártási ciklus után sem mutat jelentős aktivitáscsökkenést. 10. példa Az 1. példában leírt módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy szubsztrátként (5R,6S)-2-palmítoíi-oximetil-6-[l(R)-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-etil]-penem-3-karbonsav-allil-észtert alkalmazunk. Az elegyet 30 °C hőmérsékleten 7 órán át keverjük, majd a kapott terméket az 1. példában megadott módon kinyerjük. A hozam 75 %. >H—NMR spektrum (300 MHz, CDC13) <5 (ppm): 0,1 [6H, s Si(C//3)2], 0.88 [9H,s,SiC(C7/3)3], 1,32 [3H,d, CT/j-CHJ, 3,75 [1H, dd, II—6], 3,85 [111, széles s.OIlJ, 4.25 [1H, m, H—8], 4,65 [2H, s, CH2OH], 4,65-4.95 [2H,m, CWa-CH=], 5.25 -5.5 [2H, m, CH-- CV/2I, 5,60 [Hl, d, 11—5],, 5,95-6,05 [lH,m, CH2]. 11. példa 10 g (5R,6S)-2-butiril-oxi-metii-6-[T(R)-trimetilszilil-oxi-etil]-penem-3-karbonsav-allil-észtert 18,5 ml acetonban oldunk és az oldatot 95 ml 0,05 n foszfátpufferhez (pH = 7,5) adjuk. Az elegyhez hozzáadunk "200 mg 10 E/mg aktivitású szilárd, előzetesen 2 ml fenti pufferben feloldott Chromobacterium Viscosum eredetű nyers üpázt. Az. elegyet 3 órán át 40 °C hőmérsékleten, cs közben az elegy pll-ját 1 n NaOH adagolásával pH = 7,50 értéken tartjuk. A reagáltatás befejeztével az elegyet 25 C hőmérsékletre hűtjük, 2X70 ml diklór-metánnal extraháljuk, a szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk és bcpároljuk. így 97%-os hozammal 8,1 g tiszta (5R,6S)-2-hidroxi-metil-6-[l(R)t rímet íl - szilil-oxi-etil ]-pcncm-3-karbonsav-allii-és/,tcrt nyerünk. A kapott termék Hl—NMR-spektruma azonos az 1. példa termékére megadottal. 12. példa All. példában leírt módon járunk cl, de szubsztrátként (5R,6S)-2-butiril-oxi-metil-6-[ 1 -(R)-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-etil]-penem-3-karbonsav-alli!-észtert alkalmazunk, az alkalmazott enzim pedig 22 mg 1100 E/mg aktivitású Pseudomonas (E.C. 3.1.1.34) eredetű lipoprotein lipáz. Az elegyet 40 °C hőmérsékleten 4 órán át keverjük. A reagáltatás befejeztével az elegyet all. példa szerinti eljárással feldolgozva 96 %-os hozammal 8,2 g tiszta (5R,6S)-2-hidroximetil-6-[l(R)-terc-butil-dimetil-szilil-oxi-etil]-penem-3-karbonsav-allil-észtert nyerünk. K,n* (CHC13) 326 nm, X„1(ls (ClICH) 3600-3400. 1790. 1710 és 1580 cm *. P.M.R. (CDClj) 0,13 (611, s, Clla-Si), 0,93 (911, s, tBu-Si), 1,30 (3H, d, J = 7,0 Hz, CH3-CH), 3,76 (1H, dd, J=2 és 4,0 Hz, CH-CH-CH), 3,82 (1H, CH2OH),4,28 (lH.m, CH3-CHOSi-CH), 4,70 (4H, m, CH2OH + OCH2-CH = CH2), 5,28 (1H, d, J = 10 Hz, (a) képletű csoport, 5,43 (1H, d, J = 17 Hz, (a) képletű csoport, 5,62 (1H, d, J=2 Hz, CH-CH-S), 5,76-6,20 (1H, m, OCH2—CH=CH2). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek előállítására — képletben Rí jelentése tri(l —4 szénatomos alkil)-szilil-csoport, tetrahidropiranil- vagy tetraliidrofuranilcsoport, és R2 jelentése 2—5 szénatomos ídkcnilcsoport, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
