198088. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leukémiás sejtek szaporodását gátló, immunstimuláló hatású peptidek, az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
9 198 088 10 A találmány szerinti hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények általában 1 és 100 mg közötti hatóanyag-mennyiséget tartalmaznak dózisegységenként. Természetesen arra is van lehetőség, hogy az egyes készítményekben a hatóanyag-mennyisége a fent megadott határt akár lefelé, akár felfelé átlépje. A találmány szerinti eljárás további részleteit a találmány korlátozásának szándéka nélkül a következő kiviteli példákkal szemléltetjük. A leírásban alkalmazott rövidítések megfelelnek a szakirodalomban általánosan elfogadott szimbólumoknak [Biochen. J., 219, 345. (1984)]. A további jelek jelentése: „Z-” benzil-o.xi-karbonil-csoport, „Boc-” tercier butil-oxi-karbonil-csoport, „•ßu-” ' tercier butil-csoport, „Bzl-” benzil-csoport, „NB” 4-nitro-benzii-csoport, „Pfp” pentatluor-fenil-csoport. Minden aminosav ,.L-” konfigurációjú. Az olvadáspont meghatározások dr. Toíioli-féfe készülékben (Büchi, Svájc) történtek. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokat előregyártóit kovasavgél adszorbensen (DC-Fertigplatten, Merck) végeztük az alábbi oldószer elegyekben: 1. etii-acetát : törzsoidat = 19:1, 2. etil-acetát : törzsoidat = 9:1, 3. etil-acetát : törzsoidat = 4:1, 4. etil-acetát : törzsoidat = 7:3, 5. n-butanol : törzsoldat = 3:7, 6. n-butanol : ecetsav : etil-acetát : víz = 1:1:1:1. A „törzsoldat” a piridin : ecetsav : víz = 20:6:11 elegy et jelenti. A fentiekben megadott arányok térfogatarányok. A kromatogramok előhívását ninhidrinnel. valamint klórozást követően Kí-tolidin reagenssel végeztük. A fajlagos optikai forgatóképességet Perkin-Elmer 141 típusú polariméterrel határoztuk meg. Valamennyi oldószer-eltávolítárt, illetve bepárlást Bücliiféle rotációs vákuumbepárlón végeztünk 40 °C-os vízfürdőn. 1. példa Z-Lys( Z)-Glu(OBzl)-Lys( Z)-Lys(Z)-ONB 1.13 g (2.5 mmól) II-Lys(Z)-ONB-iridroklorid 10 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 0,35 ml (2,5 mmól) trietü-amint és 1,50 g (2,8 mmól) Boc-Lys(Z)-OPfp-t adunk. A reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd bepároljuk, és a visszamaradó olajat etilacetátban szuszpendáljuk. A szuszpenziót 15-15 ml 10%-os citromsavoldattal, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. A maradékként kapott Boc-Lys(Z)-Lys(Z)-ONB védett dipeptidésztert (Rf = 0,70) 10 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogén-klorid-oldattal reagáltatjuk 15 percig, majd a reakcióeiegyct 50 ml ví/.menles éterrel hígítjuk. A kivált Lys (Z )-Lys (Z)-ON B • MCI szabad dipeptid-észter-liidrokloridot (Rf = 0,30) kiszűrjük, 6 éterrel mossuk, és 15 ml dimetil-formamidban oldjuk. Az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk, és beadagolunk 1,5 g (3,0 mmól) Boc-Glu(OBzl)-OPfp-t. A reakcióelegyet 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd bepdroljuk, és a maradékot 50 ml etil-acetátban szuszpendáljuk. A szuszpenziót 15-15 ml 1 mól/liter koncentrációjú sósav-oldattal, 5%-os nátrium-Jiidrogén-karbonát-oldattal, és vízzé! mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Az olajos maradékot vízmentes éterrel megszilárdítjuk, a kapott szus/.pcnziót szűrjük, a csapadékot éterrel mossuk. így Boc-Giu(OBzl)Lys(Z)-Lys(Z)-ONB védett trípeptid-észtert kapunk (Rf = 0,85). A kapótt védett tripeptid-észtert 15 ml 8 mól/1 koncentrációjú dioxános hidrogen-kloridoldattal reagáltatjuk 15 percig, majd a reakcióelegyet 100 ml vízmentes éterrel hígítjuk. A kivált G'u(OBzl)Lys(2)-Lys(Z)-ONB • HC1 szabad tripeptid-észterhidrokloriöot szűrjük, éterrel mossuk, majd 20 ml dimetil-formamidban oldjuk. Az oldat pH-ját trietilamirmal 8-ra állítjuk, és a szuszpenz.ióhoz keverés közben 1,45 g (2,5 mmól) Z-Lys(7,)-OPÍp-t adunk. A reakcióelegyet 15 percig sz.obahöoictsékictei» keverjük, miközben az oldat piáját trietil-amin hozzáadásával 8 körüli érteken tartjuk. Ezután a reakcióelegyet 60 ml ctii-acemtai hígítjuk, és a kapott keveréket !5-15 m'l ! iiiől/! koncentrációjú vizes sósavoldattal és vízzel mossuk. A szerves fázist vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A kapott olajos maradékot etil-acctáttal megszilárdítjuk, a kivált 2,4 g Boc-Lys(Z)-Glu(OBz!)Lys(Z)-Lys(Z) ONB védett tetrapeptid-észiert kiszűrjük, 25 ml ctü-aeetátbó! átkristályosítjuk. A kapott tiszta cím szerinti termék súlya 2,0 g (62% a kiindulási Lys(Z)-ONH • 1 ICl-ra számítva). Op.: 140-142 °C; K® =0,70. * 2. példa Boy. -Arg(HO)-Lys(Boc)-Glu(O^u ■ -N!í2 1,46 g (5,0 mmól) Glu(OlBu)-Nií2 oxalátot és 2,73 g (65,0 mmói) Z-iys(Boc)-OPfp-t 10 ml dimetil-fomiamidban oldunk, majd az oldathoz 2,10 ml (15 mmól) trietil-amint csepegtetünk szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet 1 óra múlva vákuumban bepároljuk, a maradékot 50 ml etil-acetát cs 50 ml kloroform elegyébcn oldjuk. A szerves fázist háromszor 40 ml 1 mól/1 koncentrációjú vizes sósav-oldattal, és háromszor 5 %-os nátrium-hidrogén-karbonátoldattal mossuk és vízmentes nátrium-szulfáttal megszorítjuk, szűrjük, bcpároljuk. A kapott nyers. Z-Lys(Boc)-Glu(0‘Bu)-N!l2 védett dipeptid-ainidot 100 ni! etanolban oldjuk, és 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében keverés közben átbuborékoltatással hidrogénezzük. A reakció elóTehaladását •vékonyréteg-kromatográfiásan követjük (a védett dipeptid-amid 0,85, a szabad dipeptid-amid pedig 0,10 Rf értéket ad a 3 jelű oldósz.cr clegybcn). Két óra elteltével a védöcsopiul eltávolítás teljessé válik. Ekkor a szuszpenziót szűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékként kapott Lys(Boc)-G!u-5 10 15 20 2b 30 35 40 45 50 55 60 65
