198086. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immunstimuláns acil-tripeptídek előállítására
5 198 086 6 végre. Az 1. rcakciövázlutban különösen előnyösen alkalmazhatók anhidridek, főleg ciklusos anhidridek; és aktivált észterek, mint például N-hidroxi-ftálimidből és N-hidroxi-szukcinimidből származók, melyek a peptidszintézisekben használatosak. Az 1. reakcióvázlatban a 2 és 6 képletű közbenső vegyületek alfa-szubsztituált glícinrészeket tartalmaznak és kényelmesen átalakíthatok 3, illetve 7 képletű 2,5-oxazolidindion származékokká (N-karboxi-anhidridek). Ezek az anhidridek megkönnyítik a 3 és 7 vegyületen végrehajtandó reakciókat. Előállításuk céljából a 2 és 6 képletű aminosav-prekurzorokat PC1S vagy SOCl2 reagenssel reagáltatjuk. Az aktivált N-liidroxi-szukcinimid-észterek (például 10 képlet) aktivált észtercsoportján további reakciók segíthetők elő. A szakember előtt ismert módon más aktiváló csoportok is használhatók. Különösen fontos csoport az N-hidroxi-ftálimido-csoport, amely az N-hidroxi-szukcininiido-csoporttal azonos módon alkalmazható. Mindkét esetben dehídratáló kapcsoló reagenst használunk az aktív észter kialakítása céljából. Jellemző kapcsoló reagens az l-ciklohexil-3-(2- morfolino-etil)-karbodiimid-meío-/j-toluo! -szulfonát, diciklohexil-karbodiimid, N.N’-karbonil-diimidazol, N-(3-dimetil-amino-propiI)-N’-eti]-karbodiimid-hidroklorid, etoxi-acetilén, difenil-ketén és N-etil-5-fenilizoxazolidén-S’-szulfonát. A kapcsoló reagensek használatának reakciókörülményei az irodalomból ismertek. Általában közömbös oldószert, és szobahőmérséklet és 100 °C közötti hőmérsékletet alkalmazunk. Előnyben részesítjük a fenti karbodiimid reagenseket, mivel környezeti hőmérséklet alkalmazását és a kívánt észterek kielégítő kitermelését teszik lehetővé. A találmány szerinti termékek különféle kórokozó mikroorganizmusok, különösen Gram-ncgatív baktériumok okozta betegségek kezelésére használhatók emlősöknél, beleértve az embert. Immunstimulánsokként is használhatók fennálló, vagy klinikailag indukált immunszuppresszió következtében fertőzésekre fokozottan hajlamos egyéneknél. A C3H/HeN törzsű hím egereket (Charles River Breeding Laboratory) alkalmazó kísérleti eljárás a következő: az egereket használat előtt 5 napig aklimatizáljuk, majd vagy szubkután (s.c.) vagy orálisan (p.o.) a vizsgálandó vegyület különböző hígításaival (10, 1 és 0,1 mg per kg) vagy placeboval (pirogénmentes sóoldat) kezeljük 0,2 ml térfogatban. A kezelési rend függ a használt fertőző organizmustól: - 24 és 0 óra Klebsiella pneumoniae', és -6, -5, -4 és —1 nap Escherichia coli vagy Pseudomonas aeruginosa alkalmazása előtt. A fertőző ágenst intramuszkulárisan (im.) adjuk be a csípőbe K. pneumoniae esetén, és intraperitoneáiisan (ip.) E. coli és P. aeruginosa esetén. A fertőző anyagot 0,2 mi térfogatban adjuk be. A pusztulást K- pneumoniae esetén 7 nap múlva, és a másik két fertőző mikroorganizmus esetén 3 nap múlva regisztráljuk. Tenyészet készítése: K. pneumoniae: lefagyasztott vér-tör/.stenyészctből agy-szív-infúziós agar (BH1) felszínére szélesztünk a tisztaság biztosítása céljából. Három telepet 4 kiemelünk a 18 órás icmczteiiyés/clböi, és 9 mi Bili tápoldatba visszük át. A tápoldat-tenyészetei 2 óráig 37 °C-on tenyésztjük forgó rázógépen, majd 0,2 ml-t több Bili ferde agar felszínére szélesztünk, 18 óráig 37 °C-on inkubáljuk, utána a ferde agarakat BHI tápoldattal mossuk, a tenyészet sűrűségét ,,Spectrcnic 20” segítségével meghatározzuk és olyan alkalmas hígítást készítünk, amely 100% pusztulást idéz elő egérnél (L.DJ0„). (körülbelül 250 CFU per álhil/CFU = telepet képező egységek). E. coli vagy P. aeruginosa: lefagyasztott vér-törzstenyészetből BHI agar felszínére szélesztünk a tisztaság biztosítása céljából. Éjszakai inkubálás után néhány telepet 250 ml-cs Erlcnmeycr-lombikban levő 100 ml Difco tápagarba helyezünk át. „New Brunswick” forgó rázógépen 18 óráig 30 °C-on inkubáljuk, majd 90 ml friss táptalajjal 1 :10 hígítást készítünk A kultúrát 30 °C-on (forgó rázógép, 200 fordulat per perc) 3 óráig inkubáljuk, a sűrűséget 78%-ra állítjuk be „Specíronic 20” segítségéve] és BHI tápoldatban olyan alkalmas hígítást készítünk, amely az egerek 90%-át elpusztítja (LDW1 jp. injekció formájában. Ha a találmány szerinti vegyületeket embernél baktériumellenes vagy immunstimuláns anyagként használjuk, úgy a vegyületeket orális, szubkután, intramuszkuláris, intravénás vagy intraperitoneális úton alkalmazzuk, általában készítmények formájában. E készítmények az alkalmazandó út, és a szokásos gyógyszerészeti gyakorlat alapján kiválasztott gyógyszerészeti vivőanyagot tartalmaznak. Például tabletták, pilulák, porok vagy szemcsék alakjában alkalmazhatók, melyek kötőanyagokat, mint például keményítőt, tejcukrot, bizonyos fajta agyagokat tartalmaznak. Alkalmazhatók például kapszulákban, a fenti vagy egyenértékű kötőanyagokkal elkeverve. Orális szuszpenziók, oldatok, emulziók, szirupok és elikszirek formájában is használhatók, melyek ízesítő és színező anyagokat tartalmazhatnak. A találmány szerinti hatóanyagok orális adagolásához körülbelül 50—500 mg-os tabletták vagy kapszulák a legtöbb esetben alkalmasak. Az orvos határozza meg az egyes betegek számára legmegfelelőbb dózist, amely függ a kortól, súlytól, az illető beteg reagálásától és az alkalmazási úttól. Mégis általában felnőtteknél a kezdeti dózis körülbelül 2—100 mg/kg per nap, egyedi vagy osztóit dózisokban. Az előnyben részesített orális dózistartomány körülbelül 10 -300 mg/kg/nnp. Az előnyben részesített parcnteráüs dózis körülbelül 1,0—100 mg/kg/nap; előnyben részesítjük a mintegy 0,1—20 mg/kg/nap tartományt. Gyógyszerkészítményeket — beleértve egységdózis formákat — is előállíthatunk, melyek a találmány szerinti vegyülcteknck a fenti célokra való felhasználására alkalmasak. Mint említettük, a dózisformát egyszeri vagy ismételt dózisokban adjuk be a kívánt hatás eléréséhez szükséges napi adag bevitele céljából. 1. példa N\N' -Dibemil-oxi-karbonil-mezo-diamino-pimelinsav 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
