198079. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidrofób cisz-platina-komplexek előállítására és liposzómába történő beépítésére
11 198 079 12 Mivel a fenti két módszerrel kapott eredmény nagyon jól összevethető' volt, és a második módszerhez csak a platina komplex ultraibolya spektrofotometriás meghatározása szükséges, a legtöbb esetben a második módszerrel határoztuk meg az EE értéket. A különböző, platinakomplex-tartalmú liposzómák (L—PT) stabilitását 0,9% nátrium-klorid-oldatban 4 °C-on, és 50% humán (AB) szérum 0,9% nátriumklorid-oldatban 37 °C-on a következő egyenlet alapján határoztuk meg: % EE x. órában stabilitás x. oraban =-------------------X 100 % EE 0. órában Az EE értékeket, amelyeket a stabilitás meghatározásához használtunk, úgy kaptuk, hogy a platinakomplex tartalmat megmértük a felülúszóban, UV spektrofotometriásán (0,9%-os NaCl oldat) vagy röntgen-fluorcszccnciásan (50%-os humán AB szérum). A NaCl oldatban a stabilitást a készítés utáni 14 napon határoztuk meg. Emellett az L—PT készítményeket mikroszkópiásan is megvizsgáltuk a 14. napon a hólyagocskák morfológiájának ellenőrzése céljából. Az 50%-os humán AB szérumban a stabilitást a készítés után 18 órával, inkubálás után vizsgáltuk. Különböző cisz-platina komplexeket kapszuláztunk multilamelláris, DMPC : DMPG = 7:3 összetételű hólyagocskába. Pt-ciklopentén-karboxilátoracém-DACH esetén a kapszulázás hatékonysága 66 % volt. A kapszulázás hatékonysága szignifikánsan emelkedett, ha tiszta transz-RR-DACH-1 vagy transz-SSDACH-t használtunk, (88% és 90%). Az I. táblázatban összefoglaltuk a Pt-neodekanoáto-racém-DACH, Pt-neodekanoáto-transz-RR-DACH, Pt-n-deci!iminodiacetáto-racém-DACH komplex alkalmazásakor kapott kapszulázás hatékonysági adatokat. I. táblázat A platina tartalmú liposzómák kapszulázásának hatékonysága különböző analógok használata esetén Platina tartalmú komplex Kapszulázás hatékonysága* % Pt-ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH-elegy 66 Pt-ciklopentén-karboxiláto-transz-RR-DACH 88 Pt-ciklopentén-karboxiláto-transz-SS-DACH 90 Pt-neodekanoáto-racém-DACH-elegy 99 Pt-neodekanoáto-transz-RR-DACH 99 Pt-N-decilimino-diaceto-racém-DACH-elegy 100 Pt-N-decilimino-diacetáto-transz-RR-DACH 98 *Legalább három kísérlet átlaga. Liposzóma összetétele DMPC : DMPG = 7 :3. Analóg kísérleteket végeztünk önmagában DMPC, DMPG, koleszterin, továbbá DMPG és DMPC más koncentrációjú kombinációja alkalmazásával, valamint koleszterinnel és anélkül, amelyek nem mutattak jobb kaps/.ulázási hatékonyságot, viszont lényegesen rosszabb EE értékek adódtak. 7. példa L-PT stabilitása vizes közegben A készítményeket 0,9%-os sóoldatban szuszpendáltuk, és 4 °C-on 14 napig inkubáltuk. A liposzómákat fénymikroszkóppal vizsgáltuk, és a szabad PT mennyiségét a sóoldatban meghatároztuk. A foszfolipidként egyedül DMPG-t tartalmazó liposzómák szignifikáns, mikroszkópiásan meghatározható slrukturális változást mutattak. A szabad PT-t meghatároztuk, és a stabilitást a liposzótuában maradt PT% formájában számoltuk. Az eredményeket a II. táblázatban foglaltuk össze. II. táblázat Platina tartalmú liposzómák stabilitása platina tartalmú liposzómát tartalmazó sósvízben 14 nap alatt* Platina komplex Stabilitás % Pt-ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH 89 Pt-ciklopentén-karboxiláto-transz-RR-DACH 94 Pt-ciklopentén-karboxiláto-transz-SS-DACH ___ Pt-neodccanáto-racém-DACH 100 Pt-neodecanáto-transz-RR-DACH 99 Pt-iminodiacetáto-racém-DACH 100 Pt-imino-diacetáto-transz-RR-DACH . 100 *Liposzóma összetétel: DMPC : DMPG = 7:3. Amint az eredményekből látható, mind a Pt-ciklopentén-karboxiláto-transz-RR-DACH, mind a Pt-neodekanoáto-racém-DACH nagyobb stabilitást mutatott, mint a Pt-ciklopentén-karboxiláto-racém-DACH. 8. példa Toxicitási vizsgálatok L-PT-vel (ciklopenténkarboxiláto-racém-DACl!) Toxikológiai vizsgálatokat végeztünk 6—8 hetes, 22—25 g súlyú DC-1 svájci egereken (The University of Texas Science Park, Texas, USA forgalmazza). Intraperitoneálisan (ip) 0,1-0,3 ml-t adagoltunk a következő készítményekből: szabad PT hidroxi-propil-cellulózban, DMPG-ben, DMPG—PT-ben, DMPC :DMPG 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
