198076. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-alkilezett glicerofoszfo- és dezoxi-glicerofoszfoszerin származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 198 076 8 oxi-2-fluor-l-0-hexadecil-glicero-foszforsavat kapunk, amelyet piridinium-só formájában az 1b. példában leírtak szerint védett szerinnel 2-dezoxi-2-fluor-l-0- hcxadecil-glicero-3-foszfor-N-(terc-butoxi-karbonil)-L- szcrin-benzhidril-és/.tcrré kondenzálunk, vékonyrélcgkroinatográfiás Rf értéke (Merck-alufólia, Kieselgél 60): 0,73 (futtatóelegy: kloroform, metanol és 25%-os vizes ammóniaoldat 65 :35 : 5 térfogatarányú elegye). A védőcsoportot az le. példában leírtak szerint lehasítva cím szerinti O-alkil-glicerofoszfo-szerint kapunk. Vékony-rétegkromatográfiás Rf értéke (Merck féle kész lemez, Kieselgél 60): 0,13 (futtatóelegy: kloroform, metanol és víz 50:25 :4 térfogatarányú elegye). 3. példa 1 -K lór-1 -dezoxi-3-0-hexadecil-glicero-2-foszfo-L-szerin előállítása l-Klór-l-dezoxi-3-0-Iiexadecil-glicerinbó'l és foszforoxi-kloridból az la. példában leírtak szerint 1-klórl-dezoxi-3-0-hexadecil-glicero-2-foszforsavat kapunk, amelyet piridinium-só formájában az lb. példában leírtak szerint védett szerinnel kondenzálva 1-klórl-dezoxi-3-0-hexadecü-glicero-2-foszfo-N-(terc-butoxikarbonil)-L-szerin-észterré alakítunk. Vékonyrétegkromatográfiás Rf értéke (Merck alufólia, Kieselgél 60): 0,70 (futtatóelegy: kloroform, metanol és 0,25%-os vizes ammóniaoldat 65:35:5 térfogatarányú elegye). A védőcsoportokat az le. példában leírtak szerint lehasítva cím szerinti O-alkil-glicerofoszfo-szerin analógot kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf értéke (Merck-féle kész lemez, Kieselgél 60): 0,13 (kloroform, metanol és víz 50 :25 :4 térfogatarányú elegyével futtatva). 4. példa I-Klór-l-dezoxi-2-0-hexadecil-glicero-3-foszfo-L-szerin előállítása 1 g L-szerint feloldunk 45 °C-on 1,9 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú, 0,1 mól/1 kalcium-kloridot tartalmazó acetát-pufferben (pH 5,6). Az oldathoz 40 mg l-klór-l-dezoxi-2-0-hexadecil-glicero-3-foszfo-kolint, 2 ml 9:1 térfogatarányú éter-kloroform elegyet (alkoholmentes) és 100 mg, közel 550 g fehérkáposztából nyert enzim-preparátumot adunk. Az elegyet erős keverés közben 4 órán át 40 °C-on tartjuk. Szobahőmérsékletre hűtés után hozzáadunk 4,35 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú EDTA-oldatot, és a szerves oldószert nitrogéngáz-befúvatással eltávolítjuk. A visszamaradó vizes fázist 4,3-szcrcs térfogatú, 5 :8 térfogatarányú kloroform-metanol eleggyel 30 percen át keverjük, majd a nem oldódott L-szerintŐl szűréssel elválasztjuk. A szűrlethez 1 térfogat vizes és 3,7 térfogat kloroformot adunk, az elegyet 10 percen át keverjük, a szerves fázist elválasztjuk, vákuumban bepároljuk és a kapott maradékot karboxi-metilcellulózon (Servacel CM 52) oszlopkromatográfiás eljárással tisztítjuk. Az eluálást 75 ml kloroformmal (1. frakció), 500 ni 9:1 térfogatarányú kloroformmetanol-elcggyel, 500 ml 8:2 térfogatarányú kloroform-metanol eleggyel, 500 ml 7:3 térfogarányú kloroform-metanol eleggyel, és végül 500 ml 1 : 1 térfogatarányú kloroform-metanol-cleggyel végezzük (2—5. frakciók). Az 5. frakcióból 15 mg tiszta 1-klórl-dezoxi-2-0-hexadeciI-glicero-3-foszfo-L-szerint kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf értéke (Merck Kieselgél 60, kész lemez): 0,13 (kloroform-metanolviz 50:25:4 térfogatarányú futtatóeleggyel); 0,04 (kloroform, metanol és 25%-os vizes ammóniaoldat 65:52:4 térfogatarányú elegyével). A termék dinátriumsójának FAB-tömegspektruma: M 501, M-88-H+ Na 435, M-88-C1 378, (M + H)- 88—Cl 379. 5. példa 1 -0-Hexadecil-2-0-( 2,2,2-tri.fluor-etil)-glicero-3-foszfo-L-szerin előállítása a) 1 g L-szerin 1,9 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú, 0,1 mól/1 kalcium-kloridot tartalmazó acetát-pufferrel (pH 5,6) készült oldatához 40 mg l-0-hexadecil-2-0- (2,2,2-trifluor-etil)-glicero-3-foszfo-kolint, 2 ml etanolmentes, 9 :1 térfogatarányú éter-kloroform elegyet és 100 mg 500 g fehérkáposztából nyert foszfolipáz D preparátumot adunk. A reakcióelegyet 40 °C-on 4 órán át keverjük, majd 20 °C-on 4,35 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú EDTA-oldatot adunk hozzá, a szerves fázist nitrogéngáz befúvatással elpárologtatjuk, és a vizes fázist 4,3-szoros térfogat 5 :8 térfogatarányú kloroform-metanol eleggyel 30 percen át keverjük. A szerves fázist elválasztjuk és bcpároljuk. A kapott maradékot 20 g karboxi-metil-cellulózon oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. Az eluálást 75 ml kloroformmal (1. frakció), majd 500-500 ml 9 :1, 8 :2, 7 :3, 1 :1 térfogatarányú kloroform-metanol eleggyel (2- 5. frakciók) végezzük. Az 5. frakció bepárlásával 12 mg tiszta cím szerinti vegyüietet kapunk. Vékonyréteg-kromatográfiás Rf érték (Merck Kieselgél 60, kész lemez): 0,13 (kloroform, metanol és víz 50:24:4 térfogatarányú elegyével futtatva). b) 1 g L-szerint és 40 mg l-0-hexadecil-2-0-(2,2,2-trifluor-etil)-glicero-3-foszforsav-2-bróm-etil-észtert az a) eljárás szerint reagáltatunk. A reakcióelegy a) eljárás szerinti feldolgozásával és kromatográfiás tisztításával 13,5 mg cím szerinti vegyüietet kapunk. 6. példa 2-Dezoxi-l-0-hexadecil-glicero-3-foszfo-L-szerin előállítása 1 g L-szerin, 1,9 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú, 0,1 mól/1 kalcium-kloridot tartalmazó acetát-puffer (pH 5,6), 40 mg 2-dezoxi-l-0-hexadecü-glicero-foszforsav-ctil-észter, 2 ml 9 :1 térfogatarányú éter-kloroform elegy és 100 mg közel 500 g fchérkápos/.tából nyert foszfolipáz D preparátum elegyét 40 C-on 4 órán át erőteljesen keverjük. Az elegyet szobahő5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
