198075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új vinblasztin konjugátumok és származékaik, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
17 198 075 18 1. táblázat PéldaÖsszetétel Retenciós idő Kitermelés szám (perc) (%) 17. BSA 75% 18,687 71 APÓ 15% 17,594 THYRO 1% 14,810 IgM di. 9% 13,370 18. BSA 70% 18,917 92 APÓ 30% 17,664 19. BSA 78% 21,170 85 IgG 22% 18,147 20. BSA 69% 18,940 100 APÓ 31% 17,657 21. BSA 72% 18,664 74 APÓ 26% 17,354 IgM di 2% 13,927 22. BSA 56% 18,777 92 APÓ 26% 17,500 THYRO 18% 16,837 23. BSA 63% 20,014 85 APÓ 15% 18,410 IgM di 22% 14,274 24. IgG 100% 18,087 81 25. példa 4-[ll-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-undekanil-karboniloxi]-vinblasztin kapcsolása CTMOl monoklón antitesttel (FgG típus) 29 g 4-t 1 l-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-undekanilkarbonil-oxij-vinblasztint 8,3 g abszolút etanolban oldunk, és 332 mg FgG 47,4 ml 0,1 mól/l foszfát pufferben (pH = 8,5^) felvett oldatához csepegtetjük. A reakcióelegyet 40 C hőmérsékleten 2 óra 20 percen keresztül keverjük, 9% NaCl oldatra (pH = 7,5) kiegyensúlyozott Scphadcx G25-ön (11,6X100 cm) gélszűréssel tisztítjuk. A kihajtott csúcsot (800 ml) összegyűjtjük, ultraszűréssel koncentráljuk és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat Lowry módszerével és az alkaloidtartalmat radioaktivitás mérésével határozzuk meg. A kapott konjugátum 4,6 mól alkaloidot tartalmaz 1 mól monoklón antitestre számolva. A feliérje kitermelés 61%, a rctcnciós idő Zorba oszlopon (DuPont GF 250 + GF450) 17 perc 990/1000. 26. példa 4-[ll-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-undckanil-karbonil-oxi]-vinkrísztin 199 £d (1,53 mmól) klórhangyasav-izobutilészter 2 ml etil-acetátban felvett oldatát 453 mg (1,53 mmól) ll-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-l-undekánkarbonsav és 169 m1 (1,53 mmól) N-metil-morfolin 47 ml etil-acetátban felvett oldatához csepegtetjük 0 °C hőmérsékleten. A reakcióelegyet környezeti hőmérsékleten keverjük, majd 400 mg (0,511 mmól) 0-4-dezacetilvinkrisztin 5 ml etil-acetátban felvett oldatával elegyítjük. Az clegyct egy éjszakán keresztül keverjük, majd szűrjük és az acetátos fázist vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot szilikagéien metanol/diklórmetán 5:95 eleggyel eluálva oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. Így 136 mg tiszta terméket kapunk. Kitermelés: 25%. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, <5): 9,4, 8,75, 8,15, 8,05, 7,7, 7,55-7,2, 6,9, 6,8, 6,7, 5,9, 5,3, 5,2, 3,9,3,7, 3,65, 3,5, 2,3, 1,3, 0,9. Tömcgspekrum (FAB\ glicerol): molekulaion 1060, megfelel a C60H77N5Oi2 összegképletnek. IR spektrum (KBr) cm-1: 3700—3240, 2930, 2860, 1740, 1700, 1680, 1615, 1600, 1495, 1460, 1410, 1365, 1330, 1290, 1250, 1225, 1170, 1030, 1010,830,740,700. 27. példa 4-\l-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-ilj-2-metil-butil-karbonil-oxi]-vinblasztin ésN-a-acetil-L-Uzin-metilészter kapcsolása 100 mg (0,104 mmól) 4-[l-(2,5-dioxo-3-pirrolin-lil)-2-metil-butil-karbonil-oxi]-vinblasztin 1 ml CH2C12- ben felvett oldatát 25 mg (0,104 mmól) N-o-acetil- L-lizih-mctilésztcr és 43 jul (0,104 mmól) trictil-amin 1 ml CH2Cl2-ben felvett oldatához csepegtetjük. A reakcióelegyet egy éjszakán keresztül környezeti hőmérsékleten keverjük, majd bepároljuk. A maradékot szilikagéien metanol/CH2CI2 5 :95 eleggyel eluálva oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz): 9,85, 8,02, 7,6-7,1,6,6, 6,1, 5,8, 5,5,5,25,4,6,4,5,3,95,3,85, 3,78, 3,6,2,8, 2,7, 2,6, 2,05, 1,1,0,8-0,7. Tömegspektrum (FAB+, glicerol), 1164 (M++l), 962,751,542,355. IR spektrum (KBr) cm-1: 3460, 3040, 2940, 2870, 1775, 1740, 1720, 1660, 1610, 1500, 1460, 1430,1380,1250, 1220,730. 28. példa 4-[ll -(2,5-dioxo-3-pirrolin-l -il)-undekanil-karboniloxi]-vinkrisztin és galaktolizált humán albumin (HAgal) kapcsolása 150 ml 4-[ll-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-undekanilkarbonil-oxi]-vinkrisztint 48 ml dioxánban oldunk és 1000 mg HAgal 111 ml 0,4 mól/l foszfát pufferben (pH = 8,5) felvett oldatához csepegtetjük. A reakcióelegyet 4 órán keresztül 45 °C hőmérsékleten keverjük, majd 0,9 tömcg%-os NaCl oldatra (pH = 7,5) kiegyensúlyozott Sephadex-G25-ön (11,3X100 cm) gélszűréssel tisztítjuk. A kihajtott csúcsot (50 ml) összegyűjtjük, ultraszűréssel koncentráljuk és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat Lowry módszerével és az alka-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
