198075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új vinblasztin konjugátumok és származékaik, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
13 198 075 14 Kitermelés: 33%. NMR spektrum (CDC13, 360 MHz, ppm): 8 (1H, s, ind10’ Nil); 7.5-7.10 (411, m, U,1>H,2'II13'll14'); 6.65 (211, s, malainimid, db); 6.60 (III, s, II14); 6.08 (1H, s, H17); 5.83 (1H, m, H7); 5.48 (III. s, H4); 5.25 (1H, d, H6); 3.95 (1H, m, H17'); 3.78 (6H, s, -OCHj + C23OOCH3); 3.73 (1H, s, H2); 3.6 (3H s, C18'OOCH0; 2.7 (3H, s, NCH3); 1.25 (20H, m, -Cllj—); 0.9 0.8 (611, 5, CII3 -21 + CII3 21'). IR spektrum (KBr) cm-1: 3460, 3040, 2930, 2860, 1735, 1700, 1610, 1500, 1460, 1430, 1410, 1365, 1245,1220. Tömegspektrum (DC1, izobután): 1063, 1046 (M++ 1),1037, 1028, 1016, 312, 117. 16. példa 4-[l -(2,5-dioxo-3-pirrolin-l -il)-etil-karbonil-oxi]vinblasztin és lizin-etil-észter kapcsolása 150 mg (0,163 mmól) 4-[l-(2,5-dioxo-3-pirrolinl-il)-etil-karboni!-oxi3-vinb]asztin 1 ml etanolban felvett oldatát 40,26 mg (0,163 mmól) lizin-etil-észter XHC1 és 150 mikroliter (0,978 mmól) trietilamin 7,5 ml abszolút etanolban felvett oldatához csepegtetjük. Az elegyet egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldatot bepároljuk. A maradékot szilikagélen 14 tömeg%-os MeOII/NíI3 éteres elcgyével kromatográfiásan tisztítjuk. így 101,2 mg tiszta terméket kapunk. Kitermelés: 67%. Tömegspektrum (DC1, izobután): 1,095 (M*+2); 1,094 (M++1); 1,037; 921; 839; 769; 693; 615; 574; 532. IR spektrum (KBr) cm-1: 3,460; 2,940; 1,740; 1,710; 1,615; 1,500; 1,460; 1,430; 1,590; 1,250, 1,225; 1,120; 1,010; 735. NMR spektrum (CDC13, 360 MHz, ppm): 8 (1H, NH, 16'); 7.5-7.1 (4H, H11' H12', H13 , H14'); 6 6 (1H, s, H14); 6.08 (1H, s, H17); 5 8 (IH, m, H7); 5,45 (1H, s, H4); 5,3 (1H, m, ír); 4.8 (1H, m, CH"); 4,18 (2H, q, —OCH2); 3,83 (3H, s, OCH3); 3,78 (3H, s, OCH3); 3,6 (3H, s, OMe), 2,68 (3H s, NCH3); 1.65 (3H, d, etil CH3); 1,43 (2H, s), 1.28 (CH3, OCH2CH3); 0.9-0.8 (6H, CH3-2l + CH3-2l'). 17. példa 4-[l -/ 2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-etil-karbonil-oxi]vinblasztin és galaktozilált humán albumin (HAgal) kapcsolása 44 mg 4-[l-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-etil-karboniloxi]-vinblasztint 1 ml dioxánban oldunk. Ettől külön 50 mg HAgal-t 5 ml 0,2 mól/liter foszfát-pufferben (pH = 8,5) oldunk. A 4-[l-(2,5-dio.xo-3-pirrolin-l-il)etil-karbonil-oxi]-vinblasztin oldatát a HAgal oldatálioz adjuk. Az elegyet egy éjszakán kcrcsz.tül szobahőmérsékleten keverjük, majd 0,9 tömeg%-os nátrium* klorid oldatra (pH = 7,5) kiegyensúlyozott Sephadex- G25 (2,6X96 cm) segítségével gélszűréssel tisztítjuk. A kihajtott csúcsot összegyűjtjük, ultraszűréssel koncentráljuk és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat Lowry módszerével és az. alkaloidtartalmat radioaktivitás mérésével határozzuk meg. A kapott konjugátum 13,5 mól alkaloidot tartalmaz 1 mól galaktozilált humán albuminra számítva. 18. példa 4-[5-(2,5 -dioxo -3-pirrolin -1 -il)-pen til-karboniloxi] - vinblasztin és galaktozilált humán albumin (HAgalj kapcsolása 234 mg 4-[5-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-pentil-karbonil-oxi]-vinblasztint 1 ml dioxánban oldunk. Ettől külön 50 mg HAgal-t 5 ml 0,2 mól/liter foszfátpufferben (pH = 8,5) oldunk. A 4-[5-(2,5-dioxo-3-pirrolin-lil)-pentil-karbonil-oxi]-vinblasztin oldatát a HAgal oldatához adjuk. Az elegyet egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 0,9 tömeg%-os nátrium-klorid oldatra (pH = 7,5) beállított Scphadex-G25 (2,6X96 cm) segítségével gélszűrésseí tisztítjuk. A kihajtott csúcsot összegyűjtjük (100 ml), ultraszűréssel koncentráljuk és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat Lowry módszerével és az alkaloidtartalmat radioaktivitás mérésével határozzuk meg. A kapott konjugátum 12,7 mól alkaloidot tartalmaz 1 mól galaktozilált humán albuminra számolva. 19. példa 4-[l {2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-3-mctoxi-karbonilpropil-karbonil-oxi]-vinblasztin galaktozilált humán albumin (HAgal) kapcsolása 24 mg 4-[ 1 (2 5-dioxo-3-pirrolin-1 -il)-3-metoxi-karbonil-propil-karboml-oxij-vinblasztint 1 ml dioxánban oldunk. Ettől külön 50 mg HAgal-t 5 ml 0,2 mól/liter foszfát-pufferben (pH = 8,5) oldunk. A 4-[l-(2,5-dioxo-3 -pirrolin-l-il)-3-mctoxi-karbonil-propií-karboniloxi]-vinblasztin oldatát a HAgal oldatához adjuk. Az elegyet egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 0,9 tömeg%-os nátrium-klorid oldatra (pH = 7,5) beállított Sephadex-G25 (2,6X96 cm) segítségéve! gélszűrésseí tisztítjuk. A kihajtott csúcsot összegyűjtjük (J00 ml), ultraszűrésscl koncentráljuk és sterilizáljuk. A fehérjetartalmat Lowry módszerével és az alkaloidtartalmat radioaktivitás mérésével határozzuk meg. A kapott konjugátum 11,8 mól alkaloidot tartalmaz 1 mól galaktozilált albuminra számítva. 20. példa 4-[l-( 2,5 -dioxo-3 -pirrolin -1 -il)-2-metil-butil-karbo - nil-oxi]-vinblasztin és galaktozilált humán albumin (HAgal) kapcsolása 250 mg 4-ll-(2,5-dioxo-3-pirrolin-l-il)-2-mctil-butil-karbonil-oxi] vinbiasztint 20 ml dioxánban oldunk. Ettől külön 591 mg HAgal-t 16,5 ml 0,4 mól/liter 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
