198057. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a biotin pentafluor-fenol-származékainak előállítására

1

2

198.057

Az összehasonlító kísérletekben használt az Amersham cég által forgalmazott termékek a következő katalógusszám alatt találhatók: 5

Biotinílált anti-egér /bjrka/ lg RPN.I001

Biotin Hált peroxldáz ♦streptaviUin RPN.104I

Mikrotitrdtor lemez lyukait szuperoxid-dizmutáz (SÓD) enzimmel (Sigma) fedtük be (5 /ag/ml). A szabadon maradt aspecifikus kötőhelyeket marha-szérum-albuminnan (BSA) telítettük. A lekötött enzimre 10 az anti-SOD monoklonális ellenanyag 1:500 szoros hígítását tettük egy órára. Alapos mosás után a találmány szerint készített, illetve az Amersham cég által

forgalmazott biotinilált anti-egér-/birka/ lg azonos, felező léptékű hígításaival 1 órát, mosás után streptavidin-biotinilált peroxidáz-komplex 500-szoros hígításával szintén egy órát inkubáltunk. Negatív kontrollként az anti-SOD ellenanyagot nem tartalmazó lyukakat használtuk. Pozitív kontrollként a jelöletlen anti-SOD után anti-egér-/nyú]/-lg-peroxidáz-konjugátum megfelelő hígításait használtuk (Dakopatts P260Kat.no.)

Az azonos körülmények között végzett 12 párhuzamos kísérlet adatai a következők:

Jelölt

ellenanyaghígítások

Anti-egér-birka

találmány Amersham szerint

biotin-F.-OPFP

anti-egér-nyúl peroxidáz konj.

500 ng/lyuk

2,00

2,00

1,87

250

1,85

1,62

0,92

100

1,64

1,13

0,50

50

0.80

0,65

0,28

25

0,38

0 29

0,12

Az egyes lyukak extinkciója közti szórás nem haladta meg a 6%-ot. A fenti értékek a negatív kontroliból adódó háttér levonása után értendők (átlagban 0,01 0,05).

Mint a példaként említett kísérlet adataiból is kitűnik, a biotin-e-OPFP-vel végzett jelzett ellenanyag legalább olyan jó, de általában jobb minőségű, mint a biotin-N-hidroxi-szukcinimid aktív észterével jelölt, ismert analóg típusú ellenanyag.

Szabadalmi igénypont

Eljárás az (I) általános képletű biotln-aktív-észterek - a képletben n értéke 0 vagy 1 -előállítására, azzal jellemezve, hogy 3Q ai) a (II) képletű biotint diciklohexil-karbodiimid

jelenlétében pentafluor-fenollal reagáltatjuk, kívánt esetben a kapott (III) képletű biotin-pentafluor-fenol-észtert e-amino-kapronsavval, majd a kapott (IV) képletű vagyületet diciklohexil-karbodiimid jelenlétében pentafluor-fenollal reagáltatjuk, vagy 35 aj) egy olyan (I) áltlalános képletű vegyület előállítására, amelynek képletében n értéke 1

a (III) képletű biotin pentafluor-fenol-észert e-aminő-kapronsawal, majd a kapott (IV) képletű vegyületet diciklohexil-karbodiimid jelenlétében pentafluor-fenollal reagáltatjuk, vagy 40 a3) a (IV) képletű vegyületet diciklohexil-karbodiimid jelenlétében pentafluor-fenollal reagáltatjuk.

1 db rajz

Kiadja: Országos Találmányi Hivatal Felelős kiadó: Himer Zoltán o.v.

KÓDEX

4