197993. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozott perkután áthatolóképességű (transzdermális fluxust fokozó) gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 197.903 elfogadható savval való reagáltálása útján állítunk elő. Ilyen sav például a?.ecetsav, ben/ocsav, hidrogén-bromid, hidrogén klorid, citromsav, l'uinársav, malejnsav, borost) ankösav, boikösav, bcn/.olszulfonsav, p-loluols/uMbnsav és metánszullonsav. Az áthatolási vizsgálatokhoz használt bőrminták 8 |() hetes hím, színtelen egereket a nyakcsigolya meghúzása útján megölünk. A Itas bőréből sebészíleg kimetszett, teljes vastagságú szeletet 1,0 cm1 2 felszíni területű, két azonos diffúziós cella közé erősítünk, A bőröket ezután mintegy 18 órán át hidratáljuk izotóniás Sörensen-pufferrel (0,067 M nátriumfoszfát, pH 7,38) a kísérletek végrehajtása előtt. A sebészi beavatkozással vagy boncolásnál kapott emberi bőrből mikrotommal mintegy 400 jrm vastag metszeteket készítünk és hasonlóan hidratáljuk. Stratum corneum rétegeket (szaruréteg) sertésvagy emberbőrből készítünk tripszines kezeléssel. Ehhez a teljes vastagságú bőrmintákból mikrotommal 350 400 /int vastaginetszeteketkészítünk, foszfátpufferrel (Sorensen puffer, pH 7,4) pufferezett sóoldatban levő, 0,5% nyers trips/jnnel 2 telített szűrőpapíron kiterítjük őket) a szaruréteg a külső felszínt képezi). Néhány óráig 37 °C'-on tartjuk, majd a stratum corneum réteget az, alatta levő rétegekről leválasztjuk, szója-tripszin inhibitorban, majd többször váltott desztillált vízben mossuk, és dróthálón kiterítve száradni hagyjuk. A mintákat felhasználásig szobahőmérsékleten exszikkátorban tartjuk. 1 Kétrekeszes cellák, Crown Glass Co., Somerville, New Jersey 2II típus, Sigma Chemical, St.Louis, MO 63178, Amerikai Egyesült Államok I, példa Amplodipin perkután fluxusának vizsgálata A 18 órán át izotóniás Sörensen pufferben (pH 7,38) hidratált szőrmentes egérbőrt elhelyezzük a diffúziós cellában. A hidratáló oldatot megfelelő donor és akceptor oldattal helyettesítjük. A folyamatos keverést mindkét cella-félben mágneses keverőpálcával biztosítjuk, amelyet 300 fordulat/perc sebességgel szinkron motor hajt. A diffúziós cellákat köpeny veszi körül, amelyet csőrendszerben keringő víz az egész 5 kísérlet alatt 37 °C-on tart. 60 90 perces időközökben a 3,0 ml akceptoroldatot eltávolítjuk és amlodipin-tartalmát nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiával (HPLC) meghatározzuk, Az akceptor kamrába friss oldatot töltünk a vizsgált anyagpótlása céljából. Kiszámítjuk az időegységre eső szállított amlodipin •0 mennyiségét és mint stacionárius fluxust regisztráljuk. Amlodipin donor/akceptor oldatok Minden vizsgálathoz amlodipin-benzolszulfonátot 1 g (2-[2-(2-amino-etoxi)-metil]-4-(2-kIór-fenil)-3-etoxi-kaibonil-5-metoxi-karbonil-6-metil-l ,4-dihjdro-piridin benzolszulfonát) használunk. 55, 30 és 20 térfogatszázalék etanolt tartalmazó 0,01 M acetát puffert (pH 5) készítünk. Az. oldatok egy részéhez annyi olajsav; t adunk, hogy koncentrációja 0,25% (térfogat per 20 térfogat) legyen (0,224%, tömeg per térfogat). Az oldatok egy másik részletéhez Azone-t adunk 0,5% (térfogat per térfogat) koncentrációban. Mindegyik hordozó esetében meghatározzuk az amlodipin-benzolszulfondt oldhatóságát 25 °C-on, a donor-fázisban 80'3-osan telített hatóanyagoldatot lehetett használni. 25 Az ikeeptor kamrában hatóanyagot és áthatolásfokozó vegyületet (olajsav vagy Azone) nem tartalmazó megfelelő oldatot használunk. Amlodipin próba Az amlodipin elemzéséhez HPLC-t alkalmazunk 240 nm-en mérő UV detektorral. A mozgó fázis 6 milltmólos I -oktán nátrium-szulfonát, 42% (térfogat per térfogat) acetonitril és 1% (térfogat per térfogat) tetrahidrofurán 0,1 M nátrium-dihidrogén-ortofoszfát pufferben, amelyet 85% (tömeg per térfogat) orto 35 foszforsavval pH 3,0-ra állítottunk be. Az átfolyási sebesség 1,0 ntl/min 32 °C-on. Az injektálás előtt minden mintát és standardot legalább 1:1 arányban felhígítunk a mozgó fázissal. A csúcsmagasság kalibrációs görbéi lineárisak, a kimutatási határ körülbelül 0,05 Mg/ml. 40 A vizsgálat eredményeit a következő táblázat foglalja össze. Táblázat Amlodipin-benzolszulfonát in vitro transzportja szőrmentes egérbőrön keresztül vizes etanol oldószerrel és Azone vagy olajsav áthatolásfokozó vegyülettel Amlodipin konc. tng/ml* Azone^ v/v% Olajsav v/v % Etanol v(v % pH Fluxus mgfnap/30 cm2 Lag periódus, óra Re lat í^ fluxus“ 97,2 0,5 _ 55 5,2 28,5 (13,2)** 3,2 17,0 94,0 0,25 55 4,9 58,0(13,2) 4,2 34,0 97,5-“ 55 5,0 7,5 (4,5) 4,1 4,4 10,0 0,5 _ 30 5,2 148,1 (13,2) 1,5 87,0 9,9 — 0,25 30 4,9 99,5 (13,4) 3,4 58,0 10,3--30 5,1 1,7 (0,2) 4,2 1,0 3,6 0,5 _ 20 5,4 59,2(13,2) 1.9 35,0 3,3 _ 0,25 20 4,9 37,9 (7,6) 5,0 22,0 3,7--20 4,9 2,2 (1,4) 3,2 1,3 * Amlodipin koncentrációja szabad bázis formájában ** A zárójelben levő számok az átlagtól való standard eltérést jelentik ^ Azone: 1 -dodedl-aza-cikloheptán-2-on " A 30% (térf. per térf) etanol jelenlétében, áthatolásfokozó vegyület nélkül kapott fluxushoz viszonyított érték 4
