197945. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új peptid antibiotikumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó készítmények előállítására
197945 tallysomycins A and B (Tallizomicin, a bleomicinnel rokon új antibiotikum-komplex, II. a tallizomicin A és B szerkezetének meghatározása), J. Antibiotics 30, 789—805 (1977); az azonosságot autentikus mintával való közvetlen összehasonlítás is megerősítette. A (III aminosav elem-analízissel megállapított tapasztalati képlete C5H9N02, EI-tömegspektruma (M+: m/z 115) is megerősíti ezt a képletet. 'H-NMR spektruma egy metilcsoport (ő: 1.5 ppm, d, J: 6,0 Hz), egy metincsoport (ő: 4,0—4,2, m) és két transz-olefines proton (ő: 6.05 ppm, d, J: 15,0 Hz és 6,57 ppm, dd, J: 6,0 és 15,0 Hz) jelenlétét mutatja. Ezek a spektrum-adatok világosan mutatják, hogy a (III) aminosav 4-amino-2- (E) -penténsav) vö.: T. Honoré, H. Hjeds, P. Krongsgaard-Larsen & T. R. Christiansen: Synthesis and Structure- Activity Studies of Analogs of v-amino-butyric Acid (GABA), Eur. J. Med. Chem., 13, 429- 434, 1978). A (III) arninosavnak fajlagos forgatóképessége ([a]p2’5=—6°, 5 n sósavban) alapján 2 (S)-konfiguráció tulajdonítható. A (IV) aminosav elemanalízise (C6Hl4N203) alapján a 4-hidroxi-lizinnek bizonyult; színkép-adatai: EI-MS (M+l: m/z 163 'H-NMR 6: 1,8—2,1 ppm, 4H, m; 3,18 ppm, 2H, t; 3,6—4,3 ppm, 2H, m); 6 n sósavoldattal kezelve v-laktont (vg-o: 1770 cm-1) képez. N. Izumiya, Y. Fujita, F. Irreverre és B. Witkop: „The Synthesis of Erythro-y-hydroxy:L- lysine and its Nonoccurrence in Collagen" (Eritro-y-hidroxi-L-lizin szintézise és első nem fordulása kollagénben; Biochemistry 4, 2501 — 2506, 1965) a 4-hidroxi-lizinek mutarotációjáról számolnak be; a (IV) aminosavra vonatkozólag megfigyelt eltolódási érték a vegyület eritro-L-konfigurációjára mutat. így a fenti adatok alapján nyilvánvaló, hogy a (IV) aminosav eritro-4-hidroxi-L-lizin. A fenti savas hidrolízis során kapott tipofil savas frakciót (V) diazometánnal kezelve és a terméket kromatográfiás módszerrel tisztítva egy olajszerű (VI) metilésztert kapunk. Ennek ibolyántúli szénkép-adatai — Xmax metanolban: 260 nm, e: 22 000; valamint egyéb spektrális adatai EI-MS (M+: m/z 210); H-NMR: 4 -CH-, 1 C-CH3 és 6 -CH2- jelenlétét mutató szignálok — azt mutatják, hogy a (VI) észter 2,4-dodekadiénsav-metilészter. A kapcsolási állandó nagysága alapján nyilvánvaló, hogy mindkét kettőskötés transz-konfigurációjú. Az eredeti (V) sav ezek szerint 2(E),4(E)-dodekadiénsav volt; vö.: R. S. Burden és L. Crombie: Amides of Vegetable Origin, XII. A new series of alka-2,4-dienoic tyramine-amides from Anacyclus pyrethrum D. C. (Compositae). J. Chem. Soc. (C), 1969: 2477—2481 (1969). Az említett öt vegyület tehát a következő: I: L-treonin CH3-CH-CH-COOH I I OH NH2 9 II: 4-amino-3-hidroxi-n-valeriansav GH3-CH-CH-CH2-COOH II nh2oh III: 4(S)-amino-2(E)-penténsav CH3-CH-CH-CH-COOH I NH IV: eritro-4-hidroxi-L-lizin NH2-CH2-CH2-CH-CH2-CH-COOH I i OH NH2 V: 2(E) ,4(E)-dodekadiénsav CH3-(CH2)6-CH=CH-CH-CH-COOH A BU-2867T A antibiotikum molekuláris képlete C27H44N406; a vegyület a 13C-NMR szerint 6 olefines szénatomot és 4 amid-szénatomot tartalmaz. Nyilvánvaló tehát, hogy a (II) aminosav mesterséges termék, amely a savas hidrolízis folyamán a természetes (III) aminosav hidratációja folytán képződött. Maga az antibiotikum ciklikus pepiidnek mutatkozik, minthogy ninhidrin-reakciója negatív és a potenciometriás titrálásnál semmilyen titrálható funkciót nem mutat. Ezt a megállapítást megerősíti az a tény is, hogy a BÜ-2867T A antibiotikum piridinben történő acetilezés egy di-O-acetil-származékot képez, amelynek színkép-adatai: EI-MT: M+=m/z 604; 'H-NMR: 2.02 ppm, 3H és 2,08 ppm 3H. Az acetát tömegspektrum-adatai erős fragmens-ionok jelenlétét mutatják m/z 179 és 322 értéknél, ami az (V) —* (I)--»szekvenciának az antibiotikumban való jelenléte utal. \ BU-2867T A antibiotikumot enzimes lebontásnak vetjük alá ficinnel, 0,01 M foszfát-pu feroldatban (pH 7,0). A reakcióelegyet 2.2 pH-értékre savanyítva n-butanollal extraháljuk és így a (VII) szerkezeti képletű savszármazékot kapjuk. A vizes oldat n-butanollal 10,0 pH-értéknél végzett további extrakciója egv (VIII) szerkezeti képletű, ninhidrinre pozitív terméket eredményez. A (VII) képlete vegyület sáínkép-adatai — IR vc-o: 1720 és 1650 cm-'; EI-MT: M+ H20: m/z 279 és M+ — Thr: m/z 179; valamint az ‘H-NMR spektrum is — azt mutatják, hogy a vegyület 2,4 dodekadíenoil-treonin ((V) —»• (I)). A feltételezett szerkezetet megerősíti az a tény is, hogry a (VII) képletű vegyület 6 n sósavoldattal hidrolizálva a fenti (I) aminosavat és (V) vegyületet adja termékként. A (VIII) képletéi vegyület 6 n sósavoldattal forralva a (II), (III) és (IV) savakat adja a vékonyrétegen amatográfiai elemzés szerint. A (VIII) képletű vegyület RJ-MS színképe egy molekulár s ion jelenlétét mutatja m/z 241 értéknél, ami a ciklikus peptid-szerkezetet bizonyítja. A vegyület ‘H-NMR színképe (270 MHz, DMSO-d6) két amid NH-proton jelenlétét mutatja (7,43 ppm, triplett és 9,10 ppm, széles), ami szintén összhangban van a feltételezett ciklikus szerkezettel. A széleskörűbb kötés-felbontási kísérlet eredményei azt mutattál«, hogy a (III) aminosav aminocsoportja 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
