197937. lajstromszámú szabadalom • Eljárás plipeptidek mikrobiológiai gazdasejtekben való kifejezésére használható új klónozó hordozók előállítására
197937 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első dezoxi-ribonukíeinsav-szekvenciaként egy olyan peptidnyúlványt is kódoló dezoxi-nukleinsav-szekvenciát. alkalmazunk, amely peptidnyúlvány legalább egy polipeptid áthaladását szabályozza a baktérium citoplazma membránján át. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát vagy beépítési helyet az első dezoxi-ribonukleinsav-szekvencia peptidnyúlványt meghatározó dezoxi-ribonukleinsav -szekvenciáján belül helyezzük el. 11. A 9. vagy 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát vagy beépítési helyet az első dezoxi-ribonukleinsav-szekvencia peptidnyúlványt meghatározó dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciájának 3’-végén helyezzük el. 12. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy első dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciaként olyan szekvenciát alkalmazunk, amely egy Gram-negatív festődésű baktérium külső membrán lipoproteinjének csaknem teljes aminosav-szekvenciáját meghatározza. 13. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a harmadik dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát vagy beépítési helyet egy Gram-negatív festődésű baktérium külső membrán lipoproteinjének csaknem teljes aminosav-szekvenciáját meghatározó első dezoxi-ribonukleinsav-szekvencíáján belül helyezzük el. 14. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Gram-negatív festődésű baktériumként Escherichia colit alkalmazunk. 15. Az 1 — 14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az első dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciában lipoprotein génként az Escherichia coli lipoprotein génjét alkalmazzuk. 59 16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy második dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciaként az Escherichia coli lac promoter-operátor rendszerét meghatározó szekvenciát alkalmazzuk. 17. A 14—16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy negyedik dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciaként az Escherichia coli lacl génjét kódo'ló szekvenciát alkalmazzuk. 18. Az 1 —17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy beépítési helyként EcoRI, HindlII vagy BamHI restrikciós endonukleázok által felismert szekvenciát hordozó dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát alkalmazunk. 19. Az 1. igénypont szerinti eljárás pYM061 jelű plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy az egy Gram-negatív festődésű baktérium külső membrán protein génből származó legalább egy funkcionális fragmenst meghatározó dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát, lac promoter-operátor rendszert meghatározó dezoxi-ribonukleinsav-szekvenciát, és egy transzlációs iniciáló kodonnal leolvasási fázisban kapcsolt beépítési helylyel rendelkező szekvenciát tc-rtalmazó pKEN045 plazmidot részlegesen HincII-el hasítunk, bázikus foszfatázzal kezelünk, majd a lacl gént kódoló DNS szel /enciát tartalmazó pYM058 plazmid EcoRI-gyel végzett hasításával kapott 2,4 kb-s fragmentummal összekapcsoljuk. 20. Eljárás áz 1—9. igénypontok bármelyike szerinti plazmidot tartalmazó Escherichia coli transzformánsok előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1 —19. igénypontok bármelyike szerinti plazmiddal kompetenssé tett Escherichia coli törzseket transzformálunk. 21. A 20. igénypont szerinti eljárás Escherichia coli W620 recA/pYM061 transzformáns törzs előállítására, azzal jellemezve, hogy Escherichia coli W620 recA (NRRL B-15024) törzset a 19. igénypont szerinti pYM061 plazmiddal transzformálunk. 60 5 10 15 20 25 30 35 40 45 29 lap rajz, 29 ábra 31
