197930. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alacsony viszkozitású, nagy molekulájú, szűréssel sterilizálható hialuronsav előállítására
197930 10 A fentiek mellett elvégzett analitikai és in vivo vizsgálatok azt mutatják, hogy a termék antigéntől mentes. Lovakon és nyulakon a Western Trans biot Elektrophorese technikával végrehajtott hiperimmunizálás során antitestet nem tudtunk kimutatni. 7 napos intervallum alatt 1 tömeg%-os vizes pufferolt oldatból három intramuszkuláris injekciót adtunk be, a nyulaknál 0,5 ml és a lovaknál 2,0 ml térfogat ban. Az Arthus-jelenséghez hasonló bőrreakció teszt (Arthus Phenomenon Like Skin Reaction Test), amely nyúl hiperimmunizálásából, makrofág érzékeny színezéknek a fülvénába történő befecskendezéséből és HA ezt követő intraperitoneális befecskendezéséből áll, szintén negatív indikációt, vagyis az immunreakció hiányát adja. A nátriumsó 1 tömeg%-os vizes pufferolt oldatából két ml befecskendezése ló tibiotarzális vagy radiálkarpális ízületébe nem okoz immunreakciót, mint ezt az injekció utáni duzzadásból (a pufferolt oldószer befecskendezésével összehasonlítva) megállapítottuk. 9 A fenti eredmények igazolására egy negyedik HA mintán technikai méretekben elvégzett teljes eljárást móltömeg és viszkozitás szempontjából vizsgáltuk. A mérési eredményeket 5 az 5. táblázat tartalmazza. Megjegyezzük, hogy a minták 9,0—10,0 mg/ml HA-t tartalmaztak injekciós célra alkalmas vízben oldva. A móltömeg és a viszkozitás a tekercselés hatására nő, míg a viszkozitás a hőkezelés ha- 10 tására csökken. Ennek eredményeként a kapott termék nagy móltömegű és alacsony viszkozitású. Nagy móltömegű és nagy viszkozitású termék előállításához a hőkezelési lépést elhagy- 15 juk. Ezesetben ß-propiolakton vagy y-sugársterilizálást végzünk. Az előnyös eljárás megvalósításával a 6. táblázatban megadott jellemzőkkel rendelkező termék nyerhető. Ez a táblázat a találmány 20 szerint előállított terméket a kereskedelmi forgalomban lévő termékkel (Pharmacia és Sterivet) hasonlítja össze. Az adatok igazolják a találmány szerint előállított termék előnyös tulajdonságait. 1 . táblázat A hőhatás az NaH viszkozitására, a mól tömeg változása neTkül HA minta sorszáma Viszkozitás hőkezelés előtt m2/s M w mól tömeg kezelés i hoelott Viszkozitás hőkezelés után m2/s Hőkezelés időtartama (nap) M w mól tömeg hőkezelés után 1 . 4,475.10~3 2,0 x 10 b 1,34.10-4 9 1,8 x 10 2. 9,24 .10-4 1,7 x 10 6 6,8 .IO'5 7 1 .8 x 10 3. 1,382.10 ~3 1,9 x 10 ■ 6 1,85.10~4 20* 1,8 x 10 = A kezdeti hőkezelést zárt edényben végezzük. 2. táblázat Alacsony hőmérsékletű hosszú idejű hőkezelés hatása NaH oldat viszkozitására Hőkezelés Viszkozitás Mól tömeg 2 / m /s hőkezelés nélkül 3, 18.10-4 1,1 X ÍO6 30°C, 1 hónap 40°C, 1 hónap 2,98.10“4 M X 106 2,48.10~4 1,1 X 106 50°C, 1 hónap 1,75.10 ~4 1,1 X 106 hx = Az anyagot előzetes "tekercselés" nélkül vizsgáltuk.
