197928. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonadorelin és gonadorelin-analóg hormonszintézis peptid köztitermékének racemátszegény előállítására
197928 A találmány kiindulási anyagául alkalmazott (II) képletű tripeptid — ahol Z jelentése az (I) általános képletnél megadott — új vegyület. Ezt a vegyületet a peptidkémiában szokásosan alkalmazott peptidtöredék fragmentumkondenzációs eljárással, az 1. reakcióvázlatban látható (1—2)+3 vagy l + (2— 3) -kondenzációs séma szerint állítjuk elő, miközben az egyéb funkciós csoportokat adott esetben lúgos vagy savas közegben lehasítható védőcsoportokkal, adott esetben átmenetileg védjük. A (II) képletű tripeptid szintézisét előnyösen kevés racemizálódással járó módon végezzük, azaz elkerüljük azokat a szintézislépéseket, amelyekben elszappanosítás szerepel. Ilyen megfelelő eljárás például a Z-Trp-Ser-Tyr-OH 1. reakcióvázlat szerinti előállítása. Az 1. reakcióvázlatban szereplő (II), (VI/ /2) és (VI/3) vegyületeket még nem írták le az irodalomban. A (VI/1) vegyület Shields, McGregor és Carpenter [J. Org. Chem., 26 1491 (1961)], a (VI/4) vegyület pedig E. Wünsch és K. H. Deimer [Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem., 353, 1246 (1972)] eljárása szerint állíthatók elő. Azt találtuk, hogy az 1 reakcióvázlatban ismertetett (VI/1) —>(VI/ /4) reakcióút szokatlanul gyorsan és egyszerűen vezetett a célhoz, mivel az egyes köztitermékek kristályos formában, jó hozammal keletkeznek és tisztaságuk nagyfokú. Említésre méltóan egyszerű a hidrogénezési lépés kivitelezése, amellyel a dipeptidről a védőcsoportokat eltávolítjuk (lásd az 5.2 példában.) Az alkalmazott rövidítések jelentése: Boc terc-butil-oxi-karbonil-csoport DCCI diciklohexil-karbodiimid DMF dimetil-formamid Et etilcsoport HOBt 1-hidroxi-benzotriazol HONSu N-hidroxi-szukcinimid HOOBt 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin MEPA metil-etil-foszfinsavanhidrid ONb p-nitro-benzil-észter ONSu N-hidroxi-szukcinimid-észter OBut terc-butil-észter PPA n-propil-foszforisavanhidrid But terc-butil-éter Tos-OH p-toluol-szulfonsav Z benzil-oxi-karbonil NEM N-etil-morfolin. A következő példák a találmány szerinti eljárás megvilágítását szolgálják, a példák nem korlátozó jellegűek. A példák egy részében a technika állásának megfelelő eljárással végzett összehasonlító kísérleteket ismertetünk. 1.1. példa Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEtTos-OH előállítása DCCI/HOBt eljárással 7 29,4 g (0,05 mól) Z-Trp-Ser-Tyr-OH-t, 44.7 g (0,05 mól) H-D-Ser (But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-2Tos-OH-t és 6,75 g 1-hidroxi-benzotriazolt 250 ml DMF-ban oldunk és az oldatot +5°C-ra hűtjük. Ezután az oldathoz 6,4 ml N-etil-morfolint és 11,3 g DCCl-t adunk, majd az adagolás befejezése után a reakcióelegy hőmérsékletét körülbelül 20°C-ra emeljük. Az elegyet éjszakán át keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot 600 ml butanolban felvesszük, majd kétszer 150 ml 5%-os nátrium-karbonát-oldattal, 150 ml 13%-os nátrium-klorid-oldattal, 150 ml 10%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldatta! és 150 ml 5%-os nátrium-klorid-oldattal extraháljuk. A szerves fázist bepároljuk, majd kiszűrjük belőle a kivált nátrium-kloridot, és a 200 ml tömény oldatot 1,5 1 diizopropil-éterbe keverjük. Az oldatot szűrjük, a csapadékot 200 ml diizopropil-éterrel mossuk, majd foszfor-pentoxidon vákuumban szárítjuk. 69%-os hozammal 44.8 g terméket nyerünk. [a]p2=—31,6° (c= = 1, dimetil-acetamid) 1.2. példa Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-Tos-OH előállítása DCCI/HOOBt eljárással Az 1.1. példa szerinti eljárást alkalmazzuk, de 1-hidroxi-benzotriazol helyett 8,15 g 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-l,2,3-benzotriazint (HOOBt) használunk. 72%-os hozammal 46,7 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]p2: —31° (c=l, dimetil-acetamid). 1.3. példa Z-Trp-Ser-Tyr-D-Ser( But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-Tos-OH előállítása DCCI/HONSu eljárással Az 1.1. példa szerinti eljárást alkalmazzuk, de 1-hidroxi-benzotriazol helyett 5,75 g N-hidroxi-szukcinimidet (HONSu) alkalmazunk. 75%-os hozammal 48,7 g cím szerinti terméket nyerünk. [a]p2=—32° (*c= 1, dimetil-acetamid). 1.4. példa Z-T rp-Ser-Tyr-D-Ser( But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-Tos-OH előállítása PPA eljárással 6,8 g (11,5 mmól) Z-Trp-Ser-Tyr-OH-t és 10,3 g (11,5 mmól) H-D-Ser (But)-Leu-Arg-Pro-NHEt-2Tos-OH-t szobahőmérsékleten 65 ml DMF-ban oldunk és az oldatot 5°C-ra lehűtjük. Ezután az oldathoz körülbelül 20 perc alatt, egyidejűleg két csöpögtetőtölcsérből hozzácsöpögtetünk 11,1 ml N-etil-morfolint és 11,1 ml n-propil-foszfonsavanhidridet 50 tömeg%-os metilén-kloridos oldat formájában. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban kb. 20 ml-re bepároljuk és 150 ml n-butanolban felvesszük. A butanolos oldatot 2X X30 ml 5%-os nátrium-karbonát-oldattal, 8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
