197927. lajstromszámú szabadalom • Eljárás opiát receptor specifikus affinitás-jelölő omega-halogén-metil-tetrapeptid-származék előállítására

197927

Kitermelés: 1,0 g sárga olaj (99%).

R/=0,59 (ciklohexán:etil - acetát:metanol = =3:2:0,5),

Rf=0,54 (ciklohexán:etil-acetát=2:1).

Analízis a C16H21N303 (303,37) képlet alapján:

számított: C:63,34%, H:7,96%, N: 13,85%, 0:15,82%;

talált: C:63,75%, H:8,12%, N:13,77%,

0:15,79%.

b) Terc-butiloxikarbonil-N-metil-fenilalanin-klórmetil-keton (Boc-MePhe-CH2Cl)

1 g (3,5 mmól) (Boc-MePhe-CHN2) védett aminosav-diazometil-ketont oldunk 10 ml éterben, és 0°C-on mólegyenértéknyi sósavat tartalmazó étert adunk hozzá.

Az így kapott olajat szilikagél oszlopkromatográfiával tisztítjuk; az oszlop méretei: d= 1,7 cm, 1=150 cm. Eluálószer: ciklohexán: :eti!acetát=6:l, az eluálás sebessége: 1,32 ml/ /perc, frakciók: 6,5 ml/5 perc. Az anyag 400 ml-nél eluálódott.

Kitermelés: 1,0 g (85%) olaj. fy=0,72 (ciklohexán:etil - acetát:metanol + =3:2:0,5),

Pf=0,56 (ciktohexán:etil-acetát=2:1). Analízis a Ci6H22C1N03 (311,81) képlet alapján:

számított: Cl: 61,63%, H: 7,11 %, N: 4,49%, Cl: 11,37%, 0:51,31%;

talált: C: 61,92%, H: 7,23%, N: 4,40%,

Cl: 11,20%, 0:50,97%.

c) N-metil-fenilalanin-klór-metil-keton-hidroklorid (HCl.H-MeRhe-CH2Cl)

600 mg (1,9 mmól) Boc-MePhe-CH2Cl védett aminosav-klór-metil-ketont oldunk 2 ml éterben és 2 ml 4,5 n sósavas étert adunk hozzá. 20—25°C-on 20 percig keverjük, majd bepároljuk. A visszamaradó olajat etil-acetátban oldva, az azonnal kristályosodni kezd. Kitermelés: 481,0 mg (80%) tűs, fehér kristályos anyag.

Op.: 145—147°C.

R/=0,57 (etil-acetát: piridin-jégecet: víz=60: :20:6:11).

Analízis a CUHI5C12N0 (248,15) képlet alapján:

számított: C:53,24%, H:6,09%, Cl:28,57%,

N: 5,64%, 0:6,44%;

talált: C:53,10%, H:6,18%, Cl:29,10%,

N: 5,43%, 0:6,18%.

d) Terc-butiioxikarbonil-tirozil-D-alanil-glici 1-N-metiI-fenilalanin-klór - metil - keton (Boc-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-CH2Cl)

410 mg (1 mmól) Boc-Tyr-D-Ala-GIy-OH védett tripeptid savat feloldunk 10 ml abszolút tetrahidrofuránban, —10°C-ra hűtjük, hozzáadunk 0,13 ml (1,3 mmól) N-metil-morfolint és 0,16 ml (1,2 mmól) klór-hangyasav-izobutilésztert.

300 mg (1,2 mmól) HCl.H-MePhe-CH2Cl aminosav-klór-metil-ketont oldunk 10 ml tetrahidrofuránban és —10°C-ra történő hűtés után 0,15 ml (1,4 mmól) N-metil-morfolint adunk hozzá. Ezt az elegyet az előző reakcióelegyhez 4

5

öntjük. —l0°C-on még egy órát keverjük, majd" egy éjszakán át 0°C-on tartjuk. Másnap bepároljuk, a visszamaradó olajat etil-acetáton és jeges In sósavoldattal, 10%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és 30%-os nátrium-klorid oldattal extráháljuk. Vízmentes magnézium-szulfáttal megszárítjuk és bepároljuk. A visszamaradó anyagot éterrel eldörzsöljük. Kromatográfiásan egységes terméket oszlopkromatográfiával nyerünk:

Az oszlop méretei: d= 1,7 cm, 1=100 cm, eluáló szer: etil-acetát; oszloptöltet: szilikagél; eluálás sebessége: 0,36 ml/perc; frakciók: 6 ml/17 perc; az anyag 170 ml-nél eluálódott. Kitermelés: 420 mg (69,6%).

Rf=0,76 (etil-acetát: piridin :jégecet:víz=240:

:20:6:11),

Rf=0,48 etil-acetát,

R/=0,21 (ciklohexán :etil-acetát:metanol=3:2: :0,5).

Analízis a C30H39CIN4O7 (603,11) képlet alapján:

számított: C:59,74%, H:6,52%, Cl:5,88%,

N: 9,29%, 0:18,57%; talált: C:60,3%, H: 6,61 %, Cl:5,52%,

N: 9,06%, 0:18,13%.

ei Tirozil-D-alanil-glicil-N-metil-fenilalanin-Hór-metil-keton-hidroklorid (HCI.H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-CH2Cl)

150 mg (0,28 mmól) védett tetrapeptid-klór-metil-ketont 5 ml 0,5n sósavas hangyasav oldatban oldunk, és 20 percig 20—25°C-on keveTetjük. Bepároljuk, lúg felett megszárítjuk és éterrel eldörzsölve kapjuk a végtermé|^gt

Kitermelés: 105 mg (78%).

R;=0,77 (etil-acetát:piridin:jégecet:víz=480: :20:6: II),

R/=0,31 (etil-acetát:piridin:jégecet:víz=240: :20:6:11).

Analízis a C25H32C12N405 (539,46) képlet alapján:

számított: C:55,66%, H: 5,98%, Cl: 13,14%, N:10,38%, 0:14,83%;

talált: C:55,32%, H: 5,86%, Cl: 13,36%,

N:10,12%, 0:14,86%.

2. példa

3H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-CH2Cl előállítása

A trícium-beépítés a Boc-Tyr-D-Ala-Gly-OH tripeptidbe történik. A védett tripeptidet Hurter-Greenwood módszerrel jódozzuk, majd a jódszármazékot katalitikus triciálással dehalogénezzük. A triciált N-terminális tripeptidet vegyesanhidrides módszerrel kapcsoljuk az N-metil-fenilalanin-klór-metil-ketonl oz.

3H-Boc-Tyr-D-Ala-Gly-OH előállítása

A védett tripeptid 3H-jelö!ését Tóth és munkatársai módszerével végezzük. 3H-Boc-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-CH2CI előállttása

5,44 GBq (4,0 pmól) 3H-Boc-Tyr-D-Ala-; -Gly-OH tripeptidet 200 pl tetrahidrofuránban oldunk, és —10°C-ra hűtjük. 4 pmól N-metil-morfolint és 4 pmól klór-hangyasav-izobutil-észtert (15 pl THF-ben oldva) adunk

6

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65