197917. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklinon-vázas glikozidok tisztítására gyantákon való szelektív adszorpció útján
— Amberlite ER 180: ismereteink szerint ez egy kismértékben ionizált ioncserélő gyanta (Rohm & Haas); — CM Sepharose Cl 6B: gyengén savas kationcserélő gyanta gyöngyalakú (átmérő 45—165 fim) agaróz gélben (Pharmacia Fine Chemicals); — CM Sephadex C25: gyengén savas kationcserélő gyanta, karboximetil funkciós csoporttal; száraz gyöngy átmérő 40—120 pm (Pharmacia Fine Chemicals); — S 112 Kastel: gyenge kationcserélő gyanta; átlagos pórusátmérő 4,7 nm (Montecatini Edison); — Karboxi-metil-cellulóz: Whatman minőség. A találmány szerinti eljárást az alábbiakban — a találmány oltalmi körének szűkítése nélkül — példákkal szemléltetjük. Számos párhuzamos összehasonlító kísérletet végeztünk, amelyek egy-egy elkülönített és konkrét nyers antraciklin glikozid tisztítására irányulnak. Ezek közül az egyik kísérlet a legközelebb álló és a technika állásából ismert eljárásnak, a másik pedig a találmány szerinti, az oltalmi igény alapját képező eljárásnak felel meg. la) példa A 4-demetoxi-daunorubicin tisztítása (a technika állása szerinti eljárással) 21 g szennyezett 4-demetoxi-daunorubicint, amelynek titere 80,2% és szennyezés-tartalma 10%, 42 ml metilalkohol és 42 ml vízmentes metilénklorid elegyében szuszpendálunk. A szuszpenziót erőteljesen kevertetjük, 5 perc alatt hozzáadunk 1000 ml vízmentes metilénkloridot és a kevertetést 1 órán át folytatjuk. A terméket szűrjük, 10 ml metilén-kloriddal és ezt követően 100 ml petroléterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. 16 g 4-demetoxi-daunorubicint kapunk, amelynek szennyezés-tartalma kb. 8%. lb) példa A 4-demetoxi-daunorubicin tisztítása (a találmány szerinti, továbbfejlesztett eljárással) 15,0 g nyers, 70,2%-os 4-demetoxi-daunorubicint, amely 18% szennyezést tartalmaz, feloldunk 3,6 1 0,5%-os nátrium-acetát-oldatban. Az oldat pH-ját ecetsavval 4,7-re állítjuk, majd felvisszük egy 400 ml Amberlite XAD 2k (Rohm and Haas) gyantával töltött, 2,5 cm átmérőjű oszlopra. Utána az oszlopot 1000 ml vízzel mossuk, majd víz és metanol 5:1 térfogatarányú elegyével eluáljuk. Az első 2000 ml térfogatú eluátumban aglikonok és különféle szennyezések vannak. Ezután az eltíciót víz és metanol 1:1 térfogatarányú elegyével folytatjuk. A következő 4500 ml eluátumban 4-demetoxi-daunorubicin és 10% szennyezés van jelen. Ennek a 4500 ml térfogatú eluátumnak a pH-ját sósavval 2,8-ra állítjuk, majd csök-3 kenteit nyomáson 1500 ml térfogatra töményítjük. A betöményített oldathoz nátrium-acetátot adva, az oldat pH-ját 4,0-ra állítjuk, és ezt az enyhén savas oldatot felviszszük egy 150 ml CM Sepharose Cl 6BR (Pharmacia) gyantával töltött, 2,5 cm átmérőjű oszlopra, áramlási sebesség: 150 ml/óra. Az adszorpció befejezése után az oszlopot először 450 ml vízzel mossuk, majd 0,03%-os sósavval eluáljuk. Az első 800 ml, 18% szennyezést tartalmazó eluátum pH-ját nátrium-acetáttal 4,7- re állítjuk, majd visszavisszük az első tisztítási szakaszba, amelynek során egy nyers 4-demetoxi-daunorubicin oldatot Amberlite XAD 2 gyantán adszorbeáItatunk. A következő, tiszta 4-demetoxi-daunorubicint tartalmazó 3500 ml térfogatú eluátumot csökkentett nyomáson 50 ml térfogatra töményítjük. A betöményített oldathoz hozzáadunk 250 ml acetont, a kivált csapadékot kiszűrjük, acetonnal mossuk és megszárítjuk. Ily módon a beméri kiindulási nyerstermékre számítva 52% hozammal 97%-os tisztaságú 4-demetoxi-daunorubicint kapunk, amelyben 3%-nál kevesebb szennyezés van. 2a) példa A daunorubicin tisztítása (a technika állása szerinti eljárással) 60.0 g szennyezett daunorubicint — amelynek titere 72,6% és szennyezés-tartalma 8% — 500 ml 1:1 térfogatarányú metilalkohohvíz elegyben oldunk. Az oldat pH-ját 4,5-re állítjuk be és a terméket 1000 ml kloroform hozzáadása után 1 órán át 5°C hőmérsékleten kristályosodni hagyjuk. Ä terméket szűrjük, kloroformmal mossuk és vákuumban szárítjuk. A kiindulási szennyezett termékre vonatkoztatva 75%-os kitermeléssel kapjuk a daunorubicint, amely 3,5% szennyezést tartalmaz. 2b) példa A daunorubicin tisztítása (a találmány szerinti továbbfejlesztett eljárással) 15.0 g 74,2%-os daunorubicin-hidrokloridot, amely 8,5% szennyezést tartalmaz, feloldunk 4500 ml vízben. Az oldat pH-ját nátrium-acetáttal 5,0-ra állítjuk, majd íelvisszük egy 400 ml SÍ líP Kastel-gyantával vagy Amberlite ER18cP (Rohm and Haas) gyantával töltött, 2,5 cm átmérőjű oszlopra; áramlási sebesség: 600 ml/óra (a gyantaágy térfogatának másfélszerese). Az oszlopot 1000 ml 1%-os nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd víz és etanol 1:1 tárfogatarányú elegyével eluáljuk. Az első 400 ml térfogatú frakciót — amely az oldott aglikonokat tartalmazza—elvetjük és folytatjuk az eluálást. A következő 260 ml térfogatú eluátum tiszta daunorubi-7 4 3 19791 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
