197909. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a metil-alfa-[5-(4,5,6,7-tetrahidro-tieno[3,2-c]piridil)]- alfa-(2 klór-fenil)-acetát jobbra forgató enantiomerjeinek, sóinak és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
197909 bahőmérsékleten. Á kapott kristályokat szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk (kitermelés: 44% a keverékre vonatkoztatva). A kapott kristályokat a lehető legkevesebb acetonban (60 ml) reflux közben feloldjuk. Szobahőmérsékletre hűtjük, a kapott csapadékot szűrjük, acetonnal mossuk és szárítjuk. Fehér kristályok, op.: 167°C, [gc]£0= =—24,85 (c=l,79 g/100 ml metanol). b) Balra forgató metil-a-[5-(4,5,6,7-tetrahidro-tieno [3,2-c] piridil) ] -a- (2-klór-fenil) - -acetát 11,3 g (0,0204 mól) kámfor-10-szulfonátot, amelyet az a) lépésben kaptunk, minimális vízben feloldunk. Lehűtjük 5°C-ra, a kapott vizes oldatot telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal lúgosítjuk. A vizes lúgos oldatot diklór-metánnal extraháljuk. A szerves oldatot szárítjuk, az oldószert lepároljuk. Színtelen olajat izolálunk (kvantitatív kitermelés). Olaj [a]í°=—50,74 (c=l,58 g/ /100 ml, metanol). c) Balra forgató metil-a-[5-(4,5,6,7-tetrahidro-tieno [3,2-c] piridil)] -a- (2-k lór-feni 1) - -acetát-hidroklorid (SR 25989 A) Az 1. példa d) lépésében leírt műveleti eljárás szerint készítjük. Kitermelés 94%. Fehér kristályok, op.: 117°C, [a]^°=—62,56 (c=l,80 g/100 ml, metanol). d) Balra forgató metil-a-[5-(4,5,6,7-tetrahidro-tieno [3,2-c] piridil) ] -a- (2-klór-f enil) - -acetát-hidrogén-szulfát (SR 25989 C) 70 g (0,126 mól) a) lépésben kapott SR 25989 B kámfor-szulfonátot telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal lúgossá teszünk diklór-metán jelenlétében. A szerves fázist dekantáljuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot 300 ml acetonnal felvesszük, majd cseppenként hozzáadunk 7,2 ml (0,126 mól) tömény kénsavat. Keverés után a keletkező kristályokat szűrjük, és acetonnal mossuk. 47,8 g fehér kristályt kapunk. Op.: 182°C [cc]q°=—51,61 (c=2,044 g/100 ml, metanol). A C, H, N analízis megfelel a képletnek. Farmakológiai vizsgálatok Az új vegyületek aggregáció-gátló hatását és toxicitását összehasonlítottuk a 82. 12 599 számú (közzétételi irat száma: 2 530 247) francia szabadalmi leírásból ismert racém elegy ezen tulajdonságaival. A 7 következőkben ennek a vizsgálatnak az eredményét ismertetjük. Ebből a találmány előnye nyilvánvalóvá válik, nevezetesen, hogy a jobbra forgató izomer sóinak nagyobb a 5 gyógyhatása, mint a racém elegynek; tulajdonképpen a balra forgató izomernek gyakorlatilag nincs a vérlemezkék aggregációját gátló hatása és toxicitása lényegesen nagyobb, mint jobbra forgató párjának. 10 A vegyületek vérlemezkék aggregációját gátló és antitrombotikus hatását patkányokon vizsgáltuk ismert módszerekkel. Ex-vivo határoztuk meg az ADP vagy a kollagén vérlemezkék aggregációjára gyakorolt hatá- S3 t 1v> Az etanolos oldatba vitt (200 mg/ml), 5 tömeg% gumiarábikumot tartalmazó, vízzel hígított terméket szájon át adagoltuk 5, egyenként 250—300 g súlyú, a CD-COBS 20 törzshöz tartozó nőstény patkányból álló csoportnak, kilogrammonként 10 ml szuszpenziót számolva, két órával a vérvétel előtt. A vért 3,8%-os vizes nátrium-citrát-oldatra vettük le (1 térf./9 térf. vér), dietil-éterrel al- 25 tatott állatokból, a hasi aorta punkciójával. A vérlemezkékben gazdag plazmát ezután 10 percig végzett 200 g-os centrifugálással választottuk el. Az aggregációt úgy váltottuk ki, hogy 2 pl aggregációt okozó oldatot adtunk 400 pl vérlemezkében dús plazmához. Az aggregációt okozó oldatok a következők voltak: — 500 pM-es vizes oldat, amelyet a Boehringer Mannheim cég forgalmaz (végső koncentráció: 2,5 pM), 35 — valamint egy, a Sigma cég által forgalmazott kollagén oldat, (1. típus), koncentrációja 0,25 g/100 ml, 3 térf.%-os ecetsavban (végső koncentráció: 12,5 pg/ml). A vérlemezkék aggregációját a G.V.R. Born 40 által a Nature 194, p. 927 (1967) helyen leírt módszerrel határoztuk meg, CoultronicsR aggregométert használva, 37°C hőmérsékleten, 900 ford./perc keveréssel. Az ADP-re bekövetkező aggregációra az agg- 45 regométer az optikai sűrűség változásával mért, a vérlemezkék aggregációjára jellemző görbét rajzol. Ennek a görbének a magasságát definiáljuk aggregációs magasságnak. Az aggregációs fok a mért aggregációs ma- 50 gasság és a 100% aggregációnak megfelelő magasság aránya, X 100. Az inhibíciós fokot a következő aránnyal határozzuk meg: 8 Összehasonlító aggregációs - a termék mért aggregációs magasság magassága----------------------------------------------------------.------------------------------- x 100 összehasonlító aggregációs magasság Az eredményeket, amelyeket egyrészt az ADP, a racém elegy klór-hidrátja (PCR 4099), a jobbra és balra forgató izomer hidrogén-szulfátjai (SR 25990 C, illetve SR 25989 C), másrészt a PCR 4099 és a jobbra, illetve balra forgató izomerek klór-hidrátjai (SR 25990 A, illetve SR 25989 A) aggregációjára kaptunk, az 1. táblázatban tüntettük Fel. Jól látható, hogy a balra forgató izomer inaktív, és a jobbra forgató izomer legalább olyan aktív, mint a racém elegy. 5
