197773. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-vinil-penam származékok előállítására
197773 A folyamatnak vízzel elegyedő szerves oldószer, például az aceton reakcióelegyhez történő hozzáadásával vethetünk véget. A kiváló proteint például centrifugálással elválasztjuk és a terméket a felülúszóból ismert módokon izoláljuk. Például a felülúszót liofilizáljuk és a terméket kromatográfiásan, például fordított fázisú HPLC-vel, vagy a protein elválasztása után az inkubációs elegy extrahálásával izoláljuk. Az eljárás során szubsztrátként használt (A) tripeptidet, a ó-(L-a-amino-adipoiI)-L-ciszteinil-D, ő-didehidro-izoleucint a következőképpen állítjuk elő: Először P.A. Bartlett és J.F. Barstow, J. Org. Chem. (1982), 47, 3933 módszere alapján előállított (1) képletű 2-(t-butiloxi-karbonil-amino) -3-metil-4-pentén-savat benzil-bromiddal és nátrium-hidrogénkarbonáttal észterezzük. A (2) képletű benzil-észtert az amincsoport t-BO£- (tercier-bu-Ö tiloxi-karbonil) védőcsoportjának eltávolítása céljából hangyasavval kezeljük és így a 2-amino-3-metil-pent-4-énsav-benzil-észtert kapjuk formiátsó formájában. A (3) képlettel jelzett formiát-só azután a (4) képlettel jellemzett védett aminocsoportot tartalmazó és észterezett dipeptiddel, a ő- (L-a-amino-adipoil) -L-ciszteinnel kapcsoljuk, ahol CBz jelentése benziloxi-karbonil-csoport. A kapcsolást J.E. Baldwin és munkatársai által a J.Chem.Soc. Perkin 1, 1981, 2253 évfolyamában közölt EEDQ módszer alkalmazásával valósítjuk meg és így az (5) és (6) általános képlettel jelölt diasztereoizomerek 1:1 arányú keverékéhez jutunk, ahol R jelentése a (4) képlettel jellemzett vegyület benzil-észterrel és CBz-vei védett delta- (L-a-amino-adipoil) -acil csoportja. Az (5) és (6) általános képletekkel jellemzett diasztereo-izomereket kromatográfiásan választhatjuk szét, például szilikagél alapú rétegkromatográfiával, etil-acetát:hexán (4:6) arányú elegyét használva eluensként. Az (5) képlettel jellemzett izomer esetében a védőcsoportokat J.E. Baldwin és munkatársai által a J.Chem.Soc. Perkin 1, 1981, 2253 folyóiratban közölt eljárás alapján cseppfolyós ammóniában nátriummal távolíthatjuk el. Ezen körülmények között mindkét benzilészter csoport, az S-benzil- és a CBz-csoport egyaránt eltávolítható, és az (A) képlettel jellemzett szabad tiol ikerionos formájához jutunk. Az (A) képlettel jellemzett tiol könnyen a ditioszármazékká oxidálódik, amely igen stabil lévén a felhasználást megelőző tárolásra egy előnyös forma. Eszerint az (A) képlettel jellemzett tiolt pH = 8-as híg ammónium-hidroxid oldatban oxigéngáz alkalmazásával alakítjuk, melyet preparatív elektroforézissel tisztíthatunk (pH = 3,5; 4 kV, 80 perc) az 5— 10 cm-nyire az anód felé vándorló ninhidrinre aktív sáv extrakciójával. 3 Az eljárás során képződő 2-metil-2-vinil-penam vegyület, a 6ß- (L-ß-amino-adipoil-amino) -2ß-2-metil-2a-vinil-penam-3-karbonsav adja a izopenicillin N Staphylococcus aureus N. C.T.C. 6571 és Sarcina lutea D.S. 292 törzsek elleni antibakteriális aktivitásának kb. 80%-át. A következő példák a találmány további részletezését szolgáltatják. 1. példa A ö-(L-a-amino-adipoil)-L-ciszteinil-D-Y-ő-didehidro-izoleucin előállítása A. Benzil-2-(t-butil-oxi-karbonil-amino) - -3-metil-pent-4-enoát P.A. Bartlett és munkatársai által a J.Org. Chem. 1982, 47, 3933-ben közölt eljárás alapján előállított 4,4-mmól 2-(t-butil-oxi-karboiil-amino)-3-metil-4-penténsavat (2R,3S; 3S, 2R) 4,4 mmól benzilbromidot, 4,4 mmól náthum-hidrogénkarbonátot és 10 mg nátriumjodidot tartalmazó száraz DMF 10 ml-ében kevertetünk 15 percig 20°C-on. Az elegyet etil - acetátban oldjuk, az oldatot háromszor vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. Az észter terméket sziiikagél alapú flash-kormatográfiával tisztítjuk, és olaj formájában 80%-os kitermeléssel nyerjük ki. VMR (300 MHz, C2HC13): delta 1,01 (3H, d, J = 6Hz, 3-CH3); 1,44 (9H, s, t-butil); 2,58—2,71 (1H, m, 3- H); 4,32—4,40 (1H, m,2-H) 5,01—5,27 (5H, m, 5-H, NH, CH2C6H5); 5,05—5,37 (1H, m, 4- H); 7,33—7,41 (5H, m, C6H5-H). IR(CHC13 oldatban); gamma,TM*: 3005 m, 1730 s (C02), 1710 s (C02), 1600 w 1502 m, 1205 s, 1160m. MS (NH3 kémiai ionizáció) m/e: 320 (MH+, 100%). B. Benzil-2-amino-3-metil-pent-4-enoát hangyasavas sója Az A lépésben előállított benzil-észter O, 40 mmól-nyi mennyiségét 1 ml hangyasavban oldjuk és az oldatot 2 óra hosszat 20°C-on kevertetjük,. Az oldat bepárlásával nyert nyers hangyasavas sót minden további tisztítás nélkül a következő lépésben használjuk fel. C. A B. lépésben előállított benzil-észier hangyasavas sóját a (4) képlettel jellemzett, védett a-amino-adipoil-L-ciszteinil dipeptiddel kapcsoljuk a J.E.Baldwinésmunkatársaiáltal a J.Chem.Soc. Perkin 1, 1981, 2253 kötetében közölt szokásos kapcsolási körülmények alkalmazásával EEDQ-val. A címben szereplő thpeptid S-benzil, cBz-csoporttal védett dibenzil-észterré 50% -os termeléssel nyerjük a megfelelő diasztereoizomer, az allo-izoleucinil tripeptid 1:1 arányú keverékeként. A védett, címben szereplő tripeptidet a dialsztereoizomer keverékéből szilikagél alapú ré-4 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
