197772. lajstromszámú szabadalom • Mikrobiológiai eljárás új, streptogramin-típusú antibiotikumok és ezeket tartalmazó takarmányadalékok előállítáásra
197772 natkoztatva. Amennyiben az antibiotikumokat takarmány adalékként a főtakarmány mellett alkalmazzuk, a koncentrációk ennek megfelelően magasabbak. A találmányt az alábbi példákkal részletesebben ismertetjük. 1. példa A Streptomyces Y-8240155 törzs kinyerése talajmintából a) Tápközeg előállítása 13 1. közeg: glükóz 1,0 g glicerin 1,0 g L-arginin 0,3 g K2HP04 0,3 g MgS04.7H20 0,2 g NaCl 0,3 g élesztőkivonat 2,0 g Fe(S04)3 10 mg CaS04.5H20 1 mg ZnS04.7H20 1 mg MnS04.7H20 1 mg agar 15,0 g desztillált víz 1 liter pH 6,5 2. közeg: glükóz 2,0 g L-aszparagin 1,0 g K2HP04 0,5 g MgS04.7H20 0,5 g talajkivonat 200 ml agar 15,0 g desztillált víz 800 ml pH 8,0 3. közeg: keményítő 10,0 g kazein 0,3 g KN03 2,0 g NaCl 2,0 g K2HP04 2,0 g MgS04.7H20 0,05 g CaC03 0,02 g FeS04 0,01 g agar 15,0 g desztillált víz 1 liter pH 7,2—7,5 A fenti tápközegeket 121°C-on 30 percen át sterilizáljuk. (b) A talajszuszpenzió előállítása 1 g földet desztillált vízben szuszpendálunk, és a szuszpenziót jól felrázzuk. Miután a föld leülepedett, a felülúszó részt a fenti öszszetételü elkülönítő közegek oltására használjuk fel. (c) Az elkülönítő közeg oltása A fenti összetételű közegek petricsészékben lévő 50—50 mi jéhez 1 ml (b) szerint kapott felülúszó részt adunk. (d) Streptomyces sp. Y8240155 elkülönítése A beoltott petricsészét 30°C-on két héten át inkubáljuk, és a növekvő telepekből a Streptomyces sp. Y-8240155 törzset kinyerjük. 2. példa A Streptomyces sp. Y-8240155 (DSM 3640) fermentálása antibiotikumok előállítása céljából 8 A mikroorganizmust az alábbi összetételű ferde élesztő/maláta-agaron tenyészt14 jük: malátakivonai 10,0 g élesztőkivonat 4,0 g glükóz 4,0 g agar 15,0 g desztillált víz I liter pH 7,0 A közeget kémcsövekbe töltjük és 121°C- on 30 percen át sterilizáljuk. A kémcsöveket megdöntjük, és így hagyjuk kihűlni. A ferdeagar felületeket az oltótenyészettel oltjuk, majd a kémcsöveket 10—15 napon keresztül 25°C-on inkubáljuk. Az idő elteltével a micélium dús, a spóraképződés gazdag. Egy ferde agar desztillált vízzel végzett lemosása útján kapott spóraszuszpenziót öt Erlenmeyer-iombik oltására használunk fel; mindegyik lombik 500 ml térfogatú, és 100 ml oltótenyészet-közeget tartalmaz. Az öt lombik helyett 5 literes szívópalackot is beolthatunk, amely 1 liter közeget tartalmaz. Oltótenyészet-közeg összetétele glükóz 15,0 g szójaliszt 15,0 g kukoricalekvár 5,0 g CaC03 2,0 g NaCl 5,0 g desztillált víz 1 liter pH 7,0 Az 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokba 100—100 ml-t, az 5 literes palackokba 1 — 1 litert töltünk, majd az edényeket 121°C-on 30 percen át sterilizáljuk. Lehűlés után a közeget spóra-szuszpenzióval oltjuk, majd 240 perc-1 frekvenciájú rotációs rázógépen (amelynek kilengése 3,8 cm = 1,5 hüvelyk) 30°C-on 72 órán keresztül rázzuk. A kapott tenyészetet arra használjuk fel, hogy az oltótenyészet második lépésének előállítása érdekében két db. 15 literes üvegfermentorban lévő 10—10 liter fenti összetételű közeget beoltunk, 8—10 tf% tenyészetet alkalmazva a közeg térfogatára számítva. Az üvegfermentoros tenyészeteket 27°C-on (± 1°C) 160—180 perc-1 fordulatszámmal végzett keverés közben 6—7 liter/perc térfogatú levegőztetés mellett 24 órán át fermentáljuk. Az oltótenyészet dúsan növekedett második lépését a termelő közeg oltására alkalmazzuk. A termelő közeg összetétele glükóz 15,0 g oldható keményítő 20,0 g szójaliszt 3,0 g pepton 3,0 g CaC03 2,0 g NaCl 2,0 g kukoricalekvár 2,0 g (NH4)2S04 0,5 g desztillált víz 1 liter pH 70 A ^ A AOC 4+0/ A —.-----U------(K ) habzásgátlót is adagolunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
