197769. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-42867 antibiotikum, addíciós sói és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
197769 a maradékot a kiindulási oldat térfogatával kb. azonos mennyiségű vízzel hígítjuk. Az oldat pH-ját 7,5-re állítjuk be és 100 ml/ /óra áramlási sebességgel felvisszük egy 5X X15 cm-es oszlopra, amely előzetesen' pH 7,5 0,04M borát-pufferrel kiegyensúlyozott elő-duzzasztott D-Ala-D-Ala-6-aminokaproil-Sepharose-4B módosított mátrixot (amelyet a 122969 sz. európai szabadalmi bejelentésben leírt módon állítottunk elő) tartalmaz. Az oszlopot 8 liter (0,5 ml/liter IN sósavval megsavanyított) vízzel mossuk. Az oszlopot ezután 1,5 (tömeg/térf.) %os ammóniumhidroxiddaí eluáljuk és 100— 100 ml-es frakciókat szedünk. A B. subtilis-szel szemben aktív frakciókat egyesítjük, nyomás alatt betöményítjük és liofilizáljuk. 1,2 g sómentesített A 42867 antibiotikum készítményt kapunk, amelynek fizikokémiai jellemzőit az előbbiekben mutattuk be. 5. példa: Az A 42867 antibiotikum HCI, Na-, Mg- és S04-sói előállítása Az 1—4. példák szerinti eljárással előállított nem-só formájú A 42867 antibiotikumot vizes oldószerben oldjuk, az oldathoz kis moláris feleslegben hozzáadjuk a megfelelő savat vagy bázist, a kapott sót az oldatból kinyerjük, és inert atmoszférában, kb. 140°C hőmérsékleten szárítjuk. Na-só: C=54,l%, N=8,2%, H=5,6%, 0=7,3, Na=l,5%, 0=28,3% Mg-só: C=54,8%, N=8,3%, H=5,4%, 0=2,15%, 1/2 Mg=0,73%, 0=28,6% S04-só: C=54,2%, N=5,6%, J=7,7%, 0=2,1%, 1/2 SO4=l,05%, 0=29,3% Na-só: o.p. > 210°C (bomlással), HCI-só:o.p. > 200°C (bomlással). SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1.) Eljárás A 42867 antibiotikum és addíciós sói előállítására, a nemsó alak a következő tulajdonságokkal jellemezhető: A) az 1. ábrán látható UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumot mutatja: lambda,TM* (nm) a) 0,IN HO 282 b) víz 282 c) pH 7,4 foszfát puffer 282 d) pH 9 foszfát puffer 282 305 (váll) e) 0,1 KOH foszfát puffer 305 265 (váll) B) a 2. ábrán látható IR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700—3100, 3000—2800 (nujol), 1650, 1580, 1460 (nujol), 1375 (nujol), 1300, 1235, 1210, 1160, 1130, 1060, 1025, 1000, 970, 840, 790— 700, 720 (nujol) 17 10 C) a 3. ábra szerinti ‘H-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-en, DMSO d6-ban) hexadeutero-dimetil-szulfoxid) felvéve, belső standardként TMS-t alkalmazva (0,00 ppm): delta, ppm: 0,90, d [(CH3)2-(CH)-]; 1,02, d [CH3-(CH)<1; 1,23, d [CH3- (CH)<); 1,52, s [CH3-C=], 1,77, m [-CH(CH3)2], 2,38, s (N-CH3), 3,0—6,35, s és m (aromás, cukor és peptid CH-k), 6,27— 9,29 (aromás CH-k, peptid NH-k és fenolos OH-k) d = dublett s = szingulett m = multiplett D) retenciós idő (R/) 0,537 a vankomicin-HCl-hez (Vancocin, Eli Lilly, R<=16,36 perc (fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) X250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) eluálószer: víz:acetonitril:2-etanolamin:trifluorecetsav 9:1:0,01:0,01 (térf./térf) áramlási sebesség: 1,6 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: vankomicin-HCI (R/=16,36 perc) (Vancocin, Eli Lilly) E) retenciós idő (Rí) 0,665 a vankomicin-HCl-hez (Vancocin, Eli Lilly, Rt 9,96 perc) viszonyítva, az elemzést fordított fázisú HPLC vei a következő körülmények között végezve: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm) Altex (Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) X 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) eluálószerek: 18 A eluálószer: CH3CN 2% 2.5 g/1 NaH2P04.H20 98% pH 6,0-ra beállítva B eluálószer: CH3CN 70% 2.5 g/1 NaH2P04.H20 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris grádiens:5—60% B eluáló,szer A eluálószerben 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,6 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: vankomicin.HCl (Rf=9,96 perc) (Vancocin, Eli Lilly) F) az elem-analízis, a minta előzetesen kb. 140°C-on közömbös atmoszférában való szárítása után a következő közelítő százalékos (átlagos) összetételt mutatja: szén 53,3% hidrogén 5,9% nitrogén 7,85% klór (összes) 4,41% klór (ionos) 2,22% szervetlen maradék 900°C-on, levegőn szárítva 0,875% G) sav-bázis titrálási görbe vízben, egy olyan minta 0,05N vizes KOH-dal való titrálása során, amelyhez előzetesen fölös meny-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
