197769. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-42867 antibiotikum, addíciós sói és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

a fordított eljárás—; azaz egy, a találmány szerinti addiciós só átalakítása a nem-só alakká — a szakember tudásához tartozik és a találmány részét képezi.

Az A 42867 antibiotikum pl. úgy alakítható át a megfelelő savaddíciós sóvá, hogy a nem-só alakot vizes oldószerben oldjuk és kis moláris feleslegben az oldathoz hozzáadjuk a kiválasztott savat. A kapott oldatot vagy szuszpenziót ezután liofilizáljuk a keresett só kinyerésére.

Abban az esetben, ha a végtermék só nem oldható egy olyan oldószerben, amelyben a nem-só alak oldható, ezt a nem-só alak szerves oldatából szűréssel nyerjük ki, a kiválasztott sav vagy bázis sztöchiometrikus mennyiségben vagy kis moláris feleslegben való hozzáadása után.

A nem-só alak úgy állítható elő, hogy egy megfelelő, savval vagy bázissal képezett sót egy vizes oldószerben oldunk, majd az oldatot a nem-só alak felszabadítására semlegesítjük.

Ha a semlegesítés után a sav vagy bázis feleslegének kiküszöbölése válik szükségessé, egy szokásos sómentesítési eljárás alkalmazható.

Megfelelően alkalmazható pl. az oszlopkromatográfia szilanizált szilikagélen, funkcionálisan át nem alakított polistirollal, akril----és meghatározott pórusnagyságú polidextrán gyantákkal (ilyen pl. a Sephadex LH 20), vagy aktív szénnel. A nemkívánatos sóknak egy vizes oldattal való eluálása után a keresett terméket víz és egy poláris vagy apoláris szerves oldószer elegyével, lineáris vagy lépcsős grádiens alkalmazásával eluáljuk; ilyen pl. az 50:50 acetonitrihvíz— kb. 100% acetonitril.

Mint a szakember számára ismert, megfelelő, tisztítási technikaként alkalmazható a gyógyászati szempontból elfogadható, illetőleg el nem fogadható savakkal (vagy bázisokkal) végzett sóképzés. Az átalakítás és elkülönítés után az A 42867 antibiotikum só alakja a megfelelő nem-só alakká vagy egy gyógyászati szempontból elfogadható sóvá alakítható át.

Egyes esetekben az A 42867 antibiotikum bázis-addfciós sója oldhatóbb vízben és hidrofil oldószerekben.

A találmány szerinti vegyület antibakteriális aktivitása in vitro különböző mikroorganizmus-tenyészetekkel, standard h ígítási próbák segítségével mutatható ki.

A MIC (minimális gátló koncentráció) meghatározásához felhasznált táptalajok és tenyésztési körülmények a következők:

— Isosensitest leves (Oxoid), 24 óra, a staphylococcusok esetében; a Strep, faecalis és a gram-negatív baktériumok (E. coli) esetében;

— Todd-Hewitt leves (Difce), 24 óra a többi streptococcus-féleség esetében;

— GC alap-leves (Difco) -f- 1% Isovitalex

11

(BBL), 48 óra, C02-dús atmoszféra a Neisseria gonorrhoeae esetében;

— agy-szí^ leves (Difco) + 1% C adalék (Difco), 48 óra a Haemophylus influenza esetében;

— AC leves (Difco), 24 óra, anaerob atmoszféra a Clostridium perfringens esetében;

— Wilkins-Chalgran agar (T. D. Wilkins &

S. Chalgren, Antimicrob. Ag. Chemother. 10, 926, 1967), 48 óra, anaerob atmoszféra a többi anaerob (C. difficile, Propionibacterium acnes, Bacteroides fragilis) esetében;

— PPLO leves (Difco) -j- 10% lószérum -f+ 1% glükóz, 48 óra a Mycoplasma galliseptieum esetében;

— PPLO leves, adalékokkal (R. T. Evans,

D. Tayler-Robinson, J. Antimicrob. Chemother. 4, 57), 24 óra az U. urealyticum esetében.

Az inkubálást 37°C-on végeztük. Az inokulumok a következők:

— 1 (térf./térf.) % 48 órás leves-tenyészet a M. gallisepticum esetében;

— kb. 104 szín-változtató egység/ml az U. urealyticum esetében;

— kb. 104—105 telepképző egység/ml a többi leves-hígításos MIC-meghatározás esetében;

— kb. 104—105 baktérium/folt (többpontos inokulátorral beoltva) az agar-hígításos MIC meghatározások (C. difficile, P. acnes, B. fragilis) esetében.

A minimális gátló koncentrációt (MIC,

pg/ml) néhány mikroorganizmusra vonatkozóan a VI. Táblázatban mutatjuk be.

VI. Táblázat

Törzs A 42867 antibiotikum,

MIC (pg/ml)

12

Staph, aureus L165 104tke/ml 0,25

Staph, epidermidis L147 ATCC 12228

(koaguláz negatív) I

Strep, pyogenes L49 C203 0,13

Strep, pneumoniae L44 UC41 0,13

Strep, faecalis L149 ATCC 7080 1

Strep, mitis L796 (klinikai izolátum) 0,25

Clostridium perfringens L290 ISS 30543 0,13

Clostridium difficile L1363 ATCC 9689 2

Propionibacterium acnes L1014 ATCC 6919 0,5

Neisseria gonorrhoeae L997

ISM68/126 128 felett

Haemphilus influenzae b típus,

L 970 ATCC 19418 Proteus vulgaris ATCC 881 L 79 Escherichia coli L47 SKF 12140 P. aeruginosa ATCC 10145 L 4 Candida albicans SKF 2270 L 145 Mycoplasma galliesepticum L431 S6 Weybridge

Azt találtuk, hogy az A 42867 antibiotikum aktív koaguláz-negatív staphylococcusokkal szemben. Az alábbiakban mutatjuk be az MIC (pg/ml) értékeket egy sor S. epi-7

197769

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65