197758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplanin) előállítására
197758 etilacetáttal. A szerves rétegeket egyesítjük, 400 ml vízzel mossuk és vákuumban kis térfogatra töményítjük be. Éter hozzáadására szilárd anyag válik ki, amelyet összegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban egy éjjelen át szobahőmérsékleten szárítjuk. így 6,1 g nyers deglukoteikoplanin-benzilészter-hidrokloridot kapunk (elemzési eredmények: deglukoteikoplanin-benzilészter-hidroklorid 65%, víz és oldószerek 15%, nem azonosított szennyezések 20%). A deglukoteikoplanin-benzilészter tisztítása szilikagél oszlopkromatográfiával 2,5 g nyers deglukoteikoplanin-benzilésztert (titere 65%) 100 ml 90%-os vizes metanolban oldunk és az oldathoz 1'0 g szilikagélt (0,06—0,2 mm, Merck 60) adunk. Az oldószert vákuumban teljesen eltávolítjuk és a maradékot felvisszük egy kromatográfiás oszlopra, amely 250 g, acetonitrilben szuszpendált szilikagélt tartalmaz. Az oszlopot a következő oldószerelegyek egymás utáni alkalmazásával fejlesztjük ki: acetonitril 250 ml acetonitrihvíz 97:3) (térf./térf.) 500 ml 94:6 +” 500 ml Az eluátumokat elvetjük, majd az oszlopot lineáris acetonitril.víz gradiens alkalmazásával fejlesztjük ki, amelyet úgy alakítunk ki, hogy 200 ml/óra sebességgel elegyítünk 1,5 liternyi mennyiségeket acetonitrihvíz 94:6 (térf./térf.) és acetonitrikvíz 70:30 (térf./ /téri.) oldószer-elegyekből. 25 ml-es frakciókat szedünk és ezeket HPLC-vel vizsgáljuk. Egyesítjük a deglukoteikoplanin-benzilésztert tartalmazó frakciókat (700 ml), majd 250 ml n butanolos 0,05M sósavat adunk az elegyhez és az oldószereket kb. 30 ml végtérfogat eléréséig ledesztilláljuk. 300 ml éter hozzáadására szilárd csapadék válik ki, amelyet összegyűjtünk, éterrel mosunk és vákuumban 40°C-on 48 órán át szárítunk. 1,8 g lényegében tiszta deglukoteikoplanin-benzilészter-hidrokloridot kapunk. Lényegében az előbbi példák szerinti eljárásokat követve és a megfelelő reagenseket alkalmazva a következő kiindulási anyagokat állíthatjuk elő: deglukoteikoplanin-4-klór-benzilészter deglukoteikoplanin-2,4-diklór-benzilészter deglukoteikoplanin-4-nitro-benzilészter deglukoteikoplanin-3,4-dinitro-benzilészter és ezek savaddíciós sói. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1.) Eljárás az L 17392 antibiotikum és savaddíciós sói előállítására, mely L 17392 antibiotikum a következő jellemzőkkel rendelkezik: a) oldható vízben pH 9 felett, vizes metanolban, etanolban és acetonban; kevéssé oldható etanolban és dimetilformamidban; 17 b) UV abszorpciós spektruma a következő abszorpciós maximumokat mutatja: — 0,1N sósavban: lambda,TM* 279 nm (E1,£,=87,l) — 0,1N nátriumhidroxidban: lambda,TM* 297 nm (E^?£= 165,3) c) IV abszorpciós spektruma — nujolban — a következő jelentősebb abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1):. 3250 (nü NH és fenolos nü OH) 1645 (amid I.) 1610 (nü COO~) 1595 (delta NH+3) 1520 (amid II.); d) D20 csere és szelektív szétkapcsolási kísérletek után 270 MHz-en Bruker WH-270 spektrométerrel felvett 'H NMR spektruma — DMSO-d6-ban 50°C-on (belső siandard TMS, delta—0,00 ppm) — néhány következő 'H NMR adattal jellemezhető (delta, multiplicitás): 2 85—3,30, 2dd; 4,12, dd; 4,37, d; 4,45, d; 4 50, d; 5,00, ddd; 5,11, d; 5,14, d; 5,35, d; 5 56, d; 5,60, d; 6,3—7,9, m; 6,55, d; 7,37, d; 7 50, d; 7,61, d; 8,26, d; 8,28, d; 8,5—10,2, s 'éles; d = dublett dd = a dublett dublettje ddd= a dublett dublettjének dublettje s = szingulett ni = multiplett e) elemanalízise a következő közelítő százalékosösszetételt (átlagosan) mutatja: szén 58,05%; hidrogén 3,58%; nitrogén 8,23%; klór 5,85% (termogravimetriás elemzéssel mért 11%-os tömegveszteség alapján végrehajtott korrekció után); f) molekulatömege 1189, amelyet FAB-MS elemzéssel is igazoltunk; g) képlete — a rendelkezésre álló adatok alapján — a következő: C58H45C12N7018; h) retenciós ideje (te) 12,2 perc az elemzést HPLC-vel végezve a következő körülmények között: 5 cm-es elő-oszlop, Perisorb RP-8-cal — 30 nm, Merck — töltve; ezt egy Hibar RT 250—4 oszlop — Merck — löveti, LiChrosorb RP-8 töltettel — 10 pm —; az eluálást lineáris lépcsős grádienssel végezzük — 10%—30% acetonitril 0,2%os vizes ammóniumformiátban —, 2 ml/ /perc áramlási sebességgel; belső standard a 2121401 sz. közzétett brit szabadalmi bejelentés szerinti teikoplanin A2 2. komponens, te =22,4 perc; i) sóképzésre képes sav-funkcióval rendelkezik; l) sóképzésre képes bázis-funkcióval rendelkezik; m) cukor-maradékot nem tartalmaz; n) 'eltételezhető kémiai képlete az (I) általános képlettel azonos, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű deglukoteikoplanin észtert — e képletben 18 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
