197758. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az L 17392 antibiotikum (deglukoteikoplanin) előállítására
197758 alkanolokra példa a metanol, etanol, propanol stb. Kitüntetett eluálószer a vizes ammóniumformiát oldat és acetonitril pH 6—8 keveréke, vagy vizes ammóniumformiát és metanol keveréke. Egy kitüntetett eljárás szerint először fordított fázisú kromatografálást hajtunk végre szilanizált szilikagélen (0,06—0,2 mm), a kifejlesztést lineáris lépcsős grádienssel (5—21% acetonitril 0,2%-os vizes ammóniumformiátban) végezzük és egy második oszlopkromatográfiás lépést iktatunk be, amelynek során eluálószerként 1:1 acetonitrihvíz elegyet alkalmazunk. Egy másik kitüntetett eljárás a következőket foglalja magában: a) a nyers antibiotikumot 1:2:3 arányú 0,2%os vizes ammóniumformiát:metanol:n-butano! elegyben oldjuk, ezt az oldatot szilanizált szilikagéllel keverjük össze és ledesztilláljuk az oldószereket; b) a maradékot felvisszük egy szilanizált szilikagél oszlop tetejére (0,06—0,2 mm), az oszlopot 9:1 0,6%-os vizes ammóniumformiát és acetonitril elegyével kifejlesztjük, az eluátumot elvetjük és az eluálást 1:9—4:6 acetonitrihvíz elegyekkel, lineáris grádiens alkalmazása mellett, folytatjuk. A következőkben példaszerűen mutatjuk be, hogyan követhető a találmány szerinti reakción alapuló eljárás vagy titráIható a reakciótermék HPLC-veh Előre meghatározott időpontokban mintát veszünk a reakcióelegyből, ezt 50:50 (térf./térf.) 0,2%-os vizes ammóniumformiát:acetonitril eleggyel kb. 2 mg/ /mi végkoncentrációra hígítjuk és a HPLC rendszerbe injektáljuk (20 pl mennyiségben). A HPLC rendszer a következő elemekből áll: Rheodyne 7125 20 pl-es injektor-kaccsal ellátott Varian 5000 kromatográf; 254 nm-en mérő UV detektor és egy 30—40 pm-es Perisorb RP-8-cal (Merck) töltött elő-oszlop, amelyet egy 10 pm-es LiChrosorb RP-8-cal előtöltött Hibar Merck oszlop (25 cm) követ. Eluálószer: lineáris grádiens (5% B A-ban — 60% B A-ban) 30 perc alatt, kb. 3 ml/perc áramlási sebesség mellett. A oldat: 0,2%-os vizes ammóniumformiát. B oldat: acetonitril. Az előbbi eljárás szerint előállított termék a lényegében tiszta L 17392 antibiotikum, amely megfelelő fizikokémiai és biológiai jel - lemzékkel rendelkezik ahhoz, hogy a jelen leírás szerint felhasználható legyen. Az L 17392 antibiotikum kristályos tiszta anyagként is előállítható vagy közvetlenül a nyers reakciótermékből, vagy a lényegében tiszta L 17392 antibiotikum kezelésével. A kristályos tiszta L 17392 antibiotikumot ténylegesen úgy állíthatjuk elő, hogy a lényegében tiszta amorf antibiotikumot 9:1 víz:acetonitril elegyben szuszpendáljuk, pH kb. 1,7-n. A pH-t előnyösen IN sósav adagolásával állítjuk be. A kapott oldatot oszlopkromatográfiával tisztítjuk, majd az összeöntött, 7 L 17392 antibiotikumot tartalmazó frakciókat kb. 24 órán át állni hagyjuk a kristályos L 17392 antibiotikum kicsapódásának lehetővé tételére. Egy kitüntetett oszlopkromatográfiás eljárás ebben az esetben abból áll, hogy a savas oldatot felvisszük egy szilanizált szilikagél oszlopra — amelyet híg vizes ammóniumformiát oldattal hoztunk egyensúlyba —, az oszlopot vízzel mossuk és lineáris grádienssol fejlesztjük ki (10—40% acetonitril vízben); áramlási sebesség 70 ml/óra, 3 órán át. Ez az eljárás alkalmazható közvetlenül a nyers L 17392 antibiotikum vagy ennek oldata esetében, amely a katalizátor eltávolítása után marad vissza a leírásban ismertetett hidrogenolitikus eljárás végén. Az L 17392 antibiotikum kristályai színtelen tűk. A „lényegében tiszta" kifejezés, ahogyan ezt a leírásban egy antibiotikus hatású anyaggal kapcsolatban alkalmazzuk, olyan anyagra utal, amelynek HPLC titere 95%-nál magasabb (ez a csúcsok területének százalékos hányadát jelenti meghatározott UV hullámhosszon, általában 254 nm-en); víz és oldószer tartalma 10—15 tömeg% és szervetlen maradék tartalma 0,5 tömeg%-nál alacsonyabb’. A deglukoteikoplanin észter származékok, amelyek a találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagként alkalmazhatók, a (II) általános képlettel ábrázolhatok; e képletben R jelentése egy alkohol alkil-maradéka, amely észter-kötést képez a szomszédos karboxilcsoporttal és katalitikus hidrogénezéssel — az előbbiek szerint — lehasítható és A, B és Z jelentése hidrogénatom. Ezek a deglukoteikoplanin észterek úgy á 1'íthatók elő, hogy egy megfelelő teikoplanin szerű anyagot ellenőrzött körülmények között észterezési eljárásnak vetünk alá. Egyszerűség kedvéért a leírásban a „teikcplanin szerű" anyag vagy szubsztrátum a következő vegyületek valamelyikét jelenti: teikoplanin, egy teikoplanin faktor, az L 17054 antibiotikum, az L 17046 antibiotikum vagy az előbbiek bármilyen arányú keveréke.. Néhány ilyen teikoplanin szerű anyag olyan (II) általános képlettel írható le, amelyben R és R1 jelentése hidrogénatom, A jelentése hidrogénatom vagy N- [ (10—11 szénatomos) alifás acil]-béta-D-glukózamin maradék, B jelentése hidrogénatom vagy N-acetil-beta-D-glukózamin maradék és Z jelentése hidrogénatom vagy alfa-D-mannóz maradék. Mint már említettük, a teikoplanin antibiotikum az Actinoplanes teichomyceticus ATCC 31121 fermentációjával állítható elő, a 4,239,751 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint. A 2121401 sz. közzétett brit szabadalmi bejelentés arra vonatkozik, hogy a teikoplanin 8 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
