197672. lajstromszámú szabadalom • Eljárás típusspecifikus vírusvakcinák előállítására, elsődlegesen juhok légzőszervi és/vagy emésztőszervi megbetegedésének megelőzésére
197672 3 4 vírustörzs kódjele Nemzetközi jelölése MNG sors; Gy/14 Ad ovi 1 00175 Kert Ad ovi 4 00363 PA/8 Ad ovi 5 00364 0RT/111 Ad bős 2 00174 H/ll reo 1 00361 Dp/13 reo 2 00362 ME 9/7 parai afluenza-3 00365 A vírusokat juhmagzat, vagy egy-két hetes bárány veséjéből készített sejttenyészeten szaporítjuk. Tápfolyadékként Hanks oldatot, fenntartóként Hanks vagy Earle oldatot használunk. A tenyésztést célszerűen a szövet teljes széteséséig folytatjuk. A tenyészethez adjuvánst adunk, majd az adjuvánssal azt alaposan összekeverjük. Bármely ismert adjuvánst használhatunk az eljáráshoz, előnyösen azonban alumíniumoxid-gélt használunk. Az előkészített oltóanyagot inaktiváljuk. A művelethez bármely ismert inaktiválószert használhatunk, előnyösen azonban etilénimint vagy formaldehidet használunk. A kapott használatra kész — vakcinához kívánt esetben még hozzáadhatunk egy tartósítószert is, előnyösen nátriumazidot. A kapott vakcinát fertőzésnek kitett választott bárányok, valamint vemhes anyajuhok beoltására használhatjuk. Az oltást a hatékonyabb védelem biztosítása végett célszerűen megismételhetjük. A találmányi megoldást az alábbi kiviteli példákkal világítjuk meg, az oltalmi kör korlátozása nélkül. 1. példa Áz előzetes szerológiai vizsgálatok szerint az adott gazdaság juhállományában Ad ovi 1, Ad bős 2 és parainíluenza-3 vírusok okoznak légző- és emésztőszervi megbetegedéseket. Ebben az esetben a Gy/14, az ORT/111 és a ME 9/7 (MNG 00175, 00174 és 00365) vírus törzseket juhmagzat veséjéből készült egyrétegű sejttenyészeten elszaporítjuk. Tápfolyadékként 10% immonglobulin mentes borjúsavót Hanks-oldatot, fenntartóként szintén Hanks-oldatot használunk. A vírusokat 2000 ml-es Roux palackokban szaporítjuk a 100%-os sejtkárosító hatás megjelenéséig. Ekkor a palackokat lefagyasztjuk, majd felolvasztás után a vírusfolyadékot centrifugálás nélkül használjuk fel a továbbiakban. A vakcinát ezután oly módon adjuváljuk, hogy a vírustenyészethez 3% alumíniumhidroxidot tartalmazó alumíniumhidroxid-gélt adunk és az így nyert szuszpenziót szobahőmérsékleten egy órán át keverjük. Az adszorbeált vírust ezután szobahőmérsékleten 24 órán át kezeljük 0,15%-os formaldehid oldattal. Az így kapott vakcinához azután tartósítószerként 0,05% nátriumazidot adunk és a vakcinát üvegekbe töltjük. 2. példa A gazdaságban az előzetes szerológiai vizsgálatok szerint Ad ovi 4, és reo 2 vírustörzsek okoznak megbetegedéseket. Ebben az esetben 20 a Kert, és a Dp/13 jelű (MNG 00363 és 00362) vírustörzseket újszülött bárány veséjéből készült egyrétegű sejttenyészeten szaporítjuk. Tápfolyadékként 10% immunglobulinmentes borjúsavót tartalmazó Hanks-oldatot, fenntar- 25 tóként Earle-oldatot használunk. A vírusokat 1500 ml-es palackokban, forgatott tenyészeten szaporítjuk a 100%-os sejtkárosító hatás megjelenéséig. Ekkor a palackokat lefagyasztjuk, majd felolvasztás után a vírusfolyadékot ^ centrifugálás nélkül használjuk fel. A vakcinát, ezután oly módon adjuváljuk, hogy a vírustenyészethez 3% alumíniumhidroxidot tartalmazó alumíniumhidroxid-gélt adunk és az így nyert szuszpenziót szobahőmérsékleten 35 egy órán át keverjük. Adjuvánsként az alumíniumhidroxid-géllel együtt I mg/ml szaponint is adunk a tenyészethez. Az inaktiválást 2000 mg/ml végkoncentrációjú etiléniminnel végezzük. 40 3. példa Egy adott juhállományban a szerológiai felmérés szerint Ad ovi 5 és reo 1 vírustörzsek okoznak járványt. Ebben az esetben a PA/8 és H/ll (00364 és 00361) jelű vírustörzseket szopósbárány veséjéből készült egyrétegű sejttenyészeten elszaporítjuk. Tápfolyadékként 10% immunglobulinmentes borjúsavót tartalmazó Hanks-oldatot és fenntartóként Earle ol- 50 datot használunk. A vírusokat 2000 ml-es palackokban forgatott tenyészeten szaporítjuk a 100%-os sejtkárosító hatás eléréséig. Ekkor a palackot lefagyasztjuk, majd felolvasztás után a vírusszuszpenziót használjuk fel a togg vábbiakban. A szuszpenzióhoz formaldehid oldatot adunk 0,15%-os végkoncentráció eléréséhez szükséges mennyiségben. Az így inaktivált vírusfolyadékhoz 3% alumíniumhidroxi'dot tartalmazó alumíniumoxid-gélt adunk és az így nyert szuszpenziót szobahőmérsékle- 60 ten egy órán át keverjük. A fentiek szerint előállított oltóanyaggal kísérleteket végeztünk az ártalmatlanság és hatékonyság megállapítása végett. Az ártalmatlanságot úgy vizsgáltuk, hogy vemhes 65 anyajuhokat, szopósbárányokat és hízóbárá-3
