197668. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Ó-ketokarbonsav-hidrazinokat és -oximokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

197668

7 8

T áblázat /folytatás/

Ink.

anyag

h2o

CoASIL

Anyag mitokondr.

palm. - kam.

hcio4

anyag

0,5

0,2-0,1

0,1

0,1

0,1

anyag

0,5

0,2-0,1

0,1

0,1

0,1

CPT I

O-érték

0,5

0,2

0,1

»

0,1

0,1

0,1

kontroll

0,5

0,2

0,1-0,1

0,1

0,1

anyag

0,5

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

anyag

0,5

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

10 ml-es Erlenmeyer lombikokba 0,5— 0,5 ml inkubációs közeget, valamint megfelelő mennyiségű vizet, koenzim A-t, a mindenkori anyagot, valamint a mitokondrium szuszpenziót pipettázzuk az előzőekben ismertetett kísérleti elrendezés szerint. Minden próbát a null-értékü kivételével, rázókészülékkel ellátott vízfürdőn, 37°C-on és 100/perc rázatás mellett 10—30 percen át, lezárás nélkül inkubáljuk. A null-próbát 0,1 ml 70%-os HCI04 adagolásával azonnal leállítjuk. Ezután minden próbára az üres-érték kivételével 0,1—0,1 ml palmitoil-karnitin (C14)-t pipettázunk 5 másodperces időeltolódással. A mintákat 37°C-on és 100/perc rázatás mellett 5 percen át vízfürdőn inkubáljuk, majd ugyanilyen időközönként 0,1—0,1 ml 70%-os HCIO4 hozzáadásával a reakciót leállítjuk.

Az inkubációs edények tartalmát ezután kis, műanyagból készült cintrifuga-csövecskékbe öntjük és hűtött centrifugában 4 x x 103/perc fordulatszámmal centrifugáljuk.

A CAT-aktivitás számítása:

25

UPC

___

Spec, aktivitás x 6Ö x 436,1 x 0,5’

30

(DFM ,, - DPM , _ )

, .. próba o-ertek

kihozatal = -------------------------------TC

DPÜ ... , ,, x T x c

100%ertek prot

35

Cp« ..... az alkalmazott palmitoil-karnitin

koncentrációja [nMol/ml];

DPM .... [beütés/perc];

Cprni....az alkalmazott mitokondrium-pro-40 tein koncentrációja (mg);

spec, akt........ az alkalmazott palmitoil-karritin speciális aktivitása [KBq/mg];

T .... inkubációs idő (perc);

kihozatal .... a képződött karnitin (C14)

4g [nMol/perc/mg/protein].

Az eredményeket a következő táblázatban foglaljuk össze:

II. Táblázat

/I/ általános képletü vegyiiletek hatása CPT I-re és CPT Il-re izolált tengerimalac-mitokondriumon

Anyag

CPT I

CPT II

Konc. /mM /

Átlagos hatás nMol / ni/mg protein

Különbség hí

Konc. /nM/

Átlagos hatás

mMol/m/mg

protein

Különbség /%/

Kontroll

NaCl

5,477

NaCl

1,198

X

A 13

0,050

4,577-16,4

0,050

0,595-50,3

A 13

0,100

4,325-21,0

0,100

0,520-56,6

6