197357. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kicsapott heterológ fehérjék tisztítására és reaktiválására

SZABADALMI

MAGYAR

NÉPKÖZTÁRSASÁG

LEÍRÁS

197357

ORSZÁGOS

TALÁLMÁNYI

HIVATAL

B

Bejelentés napja: (22) 1983.12.21. (21) (4379/83)

Elsőbbsége: (32) 1982.12.22.

(31) [06/452,187-06/452,344-06/452,363-06/452,252- 06/452,253-06/452,357-06/452,356-06/452,355]

(33) US

Közzététel napja: (41) (42) 1984.09.28.

Megjelent: (45) 1990.01.10.

.Nemzetközi osztályozás: (51) NSZ04 C 12 P 21/00

Szabadalmi Tár • •^VfA/OONA

Feltalálók: (72) Szabadalmas: (73)

Builder Stuart Elliot, Belmont, Massachusetts, Genentech Inc., South San

Jones Andrew Julina Stuart, San Mateo, Francisco, Kalifornia, US

Lin Norm Shin Chsiang, Fortes City,

Ogez John Robert, San Mateo,

Olson Kenneth Charles, Burlingame,

Pai Rong-Chang, Foster City,

Shire Steven Jacob, San Mateo,

Wetzel Ronald Burnell, San Francisco, Kalifornia, US

(54) ELJÁRÁS KICSAPOTT HETEROLÓG FEHÉRJÉK TISZTÍTÁSÁRA ÉS REAKTIVÁLÁSÁRA

1

(57) KIVONAT

A találmány új eljárás biológiailag aktiv fehérje előállítására egy gazdasejt-kultúrában heterológ expresszió-termékként termelt 5 fénytörő fehérjéből, amelynek során a gazdasejtben termelt oldhatatlan fénytörő fehérjét - adott esetben a gazdasejt-kultúra sejtjeinek megölése és ezzel a ténytörő fehérje mennyiségi arányának növelése, majd a sej- 10 tek elroncsolása után - elválasztják a nem-fénytörő terméktől, a fénytöró terméket egy ennek szolubilizálására eléggé erős denaturáló képességű denaturáló oldattal kezelik és a fehérjét szolubilizált alakjának megtartása 15 mellett, adott esetben az említett erősen denaturáló oldat tisztítása után, az alábbi kezeléssel hozzák biológiailag aktív alakba: a) az erősen denaturáló oldatot a benne

oldott fehérje oldatban tartása mellett 20

2

gyengén denaturáló oldattá alakítják, a szolubilizált fehérje diszulfid-dötéseit és erősen denaturáló oldat gyengén denaturáló oldattá alakítása előtt vagy ezt követően felhasitják, majd az említett diszulfid-kötéseket a fehérjét biológiailag aktiv konformációjúvá alakítva helyreállítják; vagy

b) az erősen denaturáló oldatot a fehérje oldatban tartása mellett egy másik, gyengén denaturáló oldatra cserélik ki; vagy

c) az erősen denaturáló oldatot az említett fehérje oldatban tartása közben gyengén denaturálóvá alakítjuk, és a fehérjét oldva tartalmazó denaturáló oldatot egy vagy több tisztítási műveletnek vetik alá.

197357