197356. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fehérjék vagy peptidek géntechnológiai úton, fúziós fehérje formán keresztül végzett előállítására
16 197356 17 60 Pro Ile Ile Gly He Cys Leu Gly CCC ATT ATT GGC ATT TGC CTC GGA 70 His Gin Alá . He Val Glu Alá Cat CAG GCG ATT GTC GAA GCT 200 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás valamely célfehérje vagy pepiid géntechnikai úton, fúziós fehérje formán keresztül végzett előállításának könnyítésére, azzal jellemezve, hogy egy Met-Xn-D’-(Y)--Z képletű aminosavszekvenciának megfelelő génszerkezetet - a képletben n jelentése 0 vagy 1, X jelentése 1-12 aminosav hosszúságú szekvencia, D’ jelentése az E. coli trp-operonjában előforduló D-peptid 23-93. aminosavának megfelelő 70 aminosav szekvenciája, illetve ennek legfeljebb 6 aminosav kiiktatásával, hozzátoldásával vagy cseréjével megváltoztatott variánsa, Y jelentése 1-4 aminosavból álló hid, amely enzimesen vagy kémiai úton hasítható, illetve lehasítható, m jelentése 1, 2, 3 vagy 4 és Z jelentése a célfehérje vagy -peptid szekvenciája - megfelelő vektorba építünk, a vektort E. coli sejtbe transzormáljuk, a 5 transzformált törzset megfelelő közegben tenyésztjük, a tenyészléból vagy a sejtekből a fúziós fehérjét izoláljuk, és a fúziós fehérjét az Y jelű hídnál hasítva a célfehérjét vagy -peptidet kinyerjük. 10 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy D’-ként a vektorba az 1. mellékletben feltüntetett DNS szekvenciát tartalmazó génszerkezetet építjük be. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljá-15 rás, azzal jellemezve, hogy X-ként 5’ AAA GCA AAG GGC 3’ kódoló szálú DNS szekvenciát tartalmazó génszerkezetet építünk be. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike sze-20 rinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a génszerkezetet fázishűen olyan vektorba építve transzformáljuk a gazdasejtbe, amely vektor az E. coli trp-operonjából a promotort, az operátort és az L-peptid riboszómakötőhelyét 25 tartalmazza. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vektor pBR 322 származék, amelyből a 29. helyen álló HindlII hely és a 2066. helyen álló'Pvull hely közötti 30 DNS-rész hiányzik. 11 ábraoldal A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 10 90.2044.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkö István vezérigazgató
