197295. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új N-(2'-amino-fenil)-benzamid származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
9 197295 10 génezünk szabványos körülmények között. A katalizátor eltávolítása után az oldószert vákuumban lepároljuk és a kristályos maradékot 1:1 arányú tetrahidrofurán/diizopropiléter-elegyböl átkristályosítjuk. Kitermelés 1,5 g (88,5%). Op. 196,7 °C (bomlik). A kiindulási anyagként alkalmazott vegyületeket a kővetkező módon állítjuk elő. N-(2’-nitrofenil)-4-formilamido-benzamid 7,9 g (0,11 mól) dimetil-formamidhoz és 80 ml száraz etil-acetáthoz nitrogéngáz légkörben 0-5 °C-on cseppenként hozzáadunk 5,9 g (46,8 mmól) oxalil-kloridot. Az elegyet ezen a hőmérsékleten keverjük 30 percig és utána hozzáadunk 5,95 g (36 mmól) 4-forn\il-amido-benzoesavat (Chem. Bér., 23., 3625., 1890.; Beilsteins Handbuch der Organischen Chemie, Springer Verlag, 14., 432., 1931) és 4,3 g (54 mmól) piridint, majd a jeges hütőfürdót eltávolítjuk. Ezután a reakcióelegyet 3 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd hozzáadjuk 5,47 g (39,6 mmól) o-nitro-anilin 15 ml száraz etil-acetáttal készített oldatát és az egészet 15 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően az oldatot ammónium-hidroxid-oldattal meglúgosítjuk, vízzel mossuk és nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert eltávolítjuk. Ily módon kristályos maradékot kapunk, amelyet ecetsav-etilészterböl át.kristályositunk. Kitermelés 1,5 g (14,6%). Op. 237,6 °C. Biológiai viselkedés összehasonlító kísérletben A 4-acetamido-N-(2’-amino-fenil)-benzaraid tumorgátló hatását vizsgáltuk a találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagok példájaként a 4-amino-N-(2’-amino-fenil)-benzamid ismert hatóanyaggal összahasonlitva, amelyről tudott, hogy in vitro és in vivo kifejezetten gátolja a különböző kísérleti tumorokat. A viszgálatot in vitro a .Colorimetric Cytotoxicity Assay' során 1210 és Mamma adenocarcinom 16c tumorsejteken végeztük. Az olyan anyagokat, amelyeknek az ICso értékei £250 /u/ml nagyságúak voltak ennél a vizsgálati rendszernél, citosztatikus hatásúnak fogadtuk el. A vizsgálat során megmutatkozott (ahogy az 1. táblázat adatai mutatják) az, hogy a találmány szerinti eljárással előállított 4-acetamido-N-(2,-amino-fenil)-benzamid 1. kifejezetten citosztatikus hatású, és 2. az összehasonlításul szolgáló hatóanyaggal körülbelül hasonló a citosztatikus aktivitása. A kapott adatokat az 1. táblázatban foglaljuk össze. 1. táblázat L 1210 Colorimetric cytotoxicity rimetriás citotoxicitás-vizsgálat assay/kolo-Vizsgált anyag ICso Mg/ml 4 -acetamido-N-(2’-amino-fenil)-benzamid 3.75 4 -amino-N-(2’-amino-fenil)-2.78-benzamid 4 -metil-amino-N- (2 ’-amino- fenil )-4.04-benzamid Mamma Adenocarcinom 16c citotoxicitás-vizsgálát Vizsgált anyag IGso jug/ml 4-acetamido-N-(2’-amino-fenil )-benzamid 0.73 4-amino-N-(2’-amino-fenil)-benzamid 0.69 4-ízobutiril-amino-N-(2'-amino--fenil)-benzamid 0.32 4-formil-amino-N-(2’-amino-fenil)-benzamid 0.40 4-(ß-hidroxi-propionil)-amino-N-(2’-amino-fenil)-benzamid 0.77 4 - gli koloil-ami no-N- ( 2 ’-amino-fenil)-benzamid 0.62 Meglepő módon azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással előállítható 4- -acetamido-N-(2’-amino-fenil)-benzamid akut intragasztrális beadás esetén sokkal kevésbé toxikus, mint az összehasonlításul szolgáló szabványos hatóanyag. Ezt igazolta egy hím egereken végzett tájékoztató kísérlet (n=4) az LDso megállapítására 7 napos megfigyelésnél. A kapott eredményeket a 2. táblázatban foglaljuk össze. 2. táblázat Akut intragasztrális toxicitás, egér d* Vizsgált anyag LDso mg/kg 4-acetamido-N-(2’-amino-fenil)-benzamid 1600 4 -amino-N- ( 2 ’-amino-fenil )-benzamid 625 Patkányokon végzett farmakokinetikus kísérletekben kizárható volt az, hogy a találmány szerinti eljárással előállított hatóanyag jelentős mértékben megjavult akut elviselhe-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
