197212. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírus- és daganatellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására
9 197212 10 A 2. táblázat adataiból kitűnik, hogy a vizsgált kombinációk lényegesen toxikusabb hatást fejtenek ki a transzformált sejtkultúrákra, a közönséges kultúrákhoz képest. A DEXA-undekánsav kombináció transzformált sejtkultúrákkal szemben kifejtett toxikus hatásának szelektív jellegét még inkább bizonyítja a triciummal jelzett uridin (3H-uridin) felvételén alapuló kísérlet, amelyet a következőképpen végeztünk. Közönséges egér embrió fibroblasztot (EEF) és szarvasmarha papilloma vírussal transzformált egér embrió fribroblasztot (EEF-SZFV) Linbro-lemezekre helyeztünk (2x xlO5 sejtet lyukanként) és 20 ug/ml DEXA-t, valamint növekvő mennyiségben (10, 20, 40, 60 és 80 ug/ml) undekánsavat tartalmazó kombinációval kezeltük. Táptalajként Earle sóval, 5% borjú plazmával kiegészített Eíi,-ílo - -féle táptalajt pH=7,5 értéken, 5% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában használtunk. Két nap múlva 1 pCi/ml aktivitású 3H-uridint, a fenti hatóanyagot azonban nem tartalmazó új táptalajt adtunk hozzá. Két órával később a 3H-uridin mennyiségét - savval csaphatjuk ki - mindegyik tenyészetben meghatároztuk. A teljes számlálás elvégzése előtt a kis molekulasúlyú komponenseket - a be nem épült 3H-uridint is - kimostuk. A számlálást ezt kővetően, a száraz kultúrával végeztük. Két tenyészetben mért átlagos radioaktivitást az 1. ábrán mutatjuk be. Az 1. ábra azt szemlélteti, hogy a találmány szerinti kombináció a transzformált sejttenyészeteket szelektíven elpusztítja vagy inaktiválja, abból a megfigyelésből következően, hogy radioaktivitást - azaz 3H-uridint - csak a közönséges sejttenyészetekben találtunk, ezzel szemben a transzformáit kultúrákban nem figyeltünk meg. 2. Vírusellenes hatás vizsgálata A hatóanyag DEXA, továbbá DEXA és dekánsav kombinációjának, valamint csak a dekánsavnak gátló hatását különböző koncentrációkban, különböző, herpes simplex virus 1-el fertőzött in vitro tenyészetekben (HSV1- -tenyészet) vizsgáltuk meg. A táptalaj pH-ja 7,4. Az inkubáció után 2 nappal a vírus-hozamot meghatároztuk, és a gátló szert nem tartalmazó megfelelő tenyészetre vonatkoztatva %-ban kifejezve az ún. plaque-képzö egységet (pfu) számítottuk ki. Az eredményeket a 3 a) táblázatban foglaltuk össze. 3 a) táblázat Vizsgált % pfu, a gátlószer nélküli gátlószer vírustenyészetre vonatkoztatva DEXA (20 ng/ml) 22.6 6 3 a) táblázat Vizsgált X pfu, a gátlószor nélküli gátlószer víruslenyészetre vonatkoztatva DF.XA (10 ng/ml) + + dekánsav 10 ug/ml 8.7 20 ug/ml 0 40 ng/ml 0.3 dekánsav 10 ng/ml 18.9 20 ug/ml 24 40 ug/ml 35 A táblázatból kitűnik, hogy a DEXA és a dekánsav kombinációja szignifikánsan erősebb gátló hatással rendelkezik, mint a kombináció összetevői önmagukban. DEXA és dodecilszulfát-nátrium só (SDS) kombinációja a HSV1 reprodukcióját hasonlóan erősen gátolja. Sejtek: Rita P 0/37; Táptalaj: BME, 5% FBS, 1% penicillin + + streptomycin; pH: =7,4; 5% COz atmoszféra; Gátlószerek: 10 ug/ml DEXA+10, 20, 40, 80 ng/ml dodecilszulfát (SDS); A Rita sejteket MOI-val fertőztük (0,05 pfu/sejt érték), és a gátló szert 2 órával a fertőzést követően alkalmaztuk (minden esetben 2 kultúrát használtunk). A vírus-szaporulatot a fertőzés után 24 óra múlva gyűjtöttük össze. A kontroli-érték: 7,7xl06 pfu/ml. Az eredményeket a 3 b) táblázatban ismertetjük. 3 b) táblázat Hatóanyagok kombinációja titer pfu/ml gátlási tényező 10 ug/ml DEXA + + 10 ug/ml SDS 2.5xl02 3xl04 10 Mg/ml DEXA + + 20 Mg/ml SDS 25 3xl05 10 ng/ml DEXA + + 40 ug/ml SDS 25 • 3xl05 10 Mg/ml DEXA + + 80 Mg/nil SDS 2.5 3x10® A nem fertőzött Rita-sejtek növekedését a hatóanyagok ugyanezen kombinációja gyakorlatilag nem gátolta. Ciklododecil-xantát (D435) és undekánsav kombinációjával hasonló eredményeket kaptunk. E kombinációt szintén megvizsgál-. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
