197043. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rekombináns DNS-t tartalmazó gazdasejtek stabilizálására és szelekciójára
3í 197043 32 en, ugyanakkor a szelektív rendszerrel rendelkező E. coli K12 C600Rt-Mk-lambclacI90/pPR12 tenyészet összes sejtje plazmid plusz. A találmány szerinti plazmidok egy ike sem mutat plazmid szegregációt. így a találmány szerinti 5 továbbfejlesztett plazmidok megkülönböztethetők a profággal nem rekombinálódott plazmidoktól. Tény, hogy a továbbfejlesztett szelektív rendszert tartalmazó sejtek növekedése után egyetlen egy plazmid mínusz telepet sem figyeltünk meg. ip Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás funkcionális polipeptidet kifejező re- 15 kombináns dezoxi-ribonukleinsavat tartalmazó E. coli gazdasejtek stabilizálására és szelektálására, azzal jellemezve, hogy a lambda bakteriofág cl re presszóit tartalmazó Pstl-HincII restrikciós fragmensét és egy funkcionális polipeptidet kifejező 20 gént tartalmazó rekombináns dezoxi-ribonukleinsavklónozó plazmiddal E. coli gazdasejteket traszformálunk, és a transzformált E. coli gazdasejteket funkcionális cl represszort nem termelő lizogén organizmussal lizogenizáijuk, amely azonban a 25 transzformált gazdasejtekben levő rekombináns dezoxi-ribonukleinsavkiónozó vektorban jelenlevő represszor gén által represszált állapotban van, azzal a fetétellel, bogy a rekombináns dezoxi-ribonukleinsav klónozó vektor a represszorra nem érzékeny 39 replikont és promotert tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a funkcionális polipeptidet kifejező génként egy természetben előforduló gént, egy természetben nem előforduló gént vagy részben tér- 35 mészetes, részben szintetikus vagy nem természetes gént alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a funkcionális polipeptidet kifejező génként a humán inzulin. A-láncot vagy a hu- 40 mán inzulin B-láncot meghatározó gént alkalmazunk. 4. Az 1., 2. vagy 3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a cl represszorkéní a c!857-et alkalmazzuk. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljáás, azzal jellemezve, hogy a lizogén organizmusként funkcionális cl represszort nem termelő lambda cl bakteriofág gént tartalmazd organizmussal li/.ogenizálunk. 6. Az 5. igénypont szerint eljárás, azzal jellemezve, hogy a lizogén organizmusként lambda cI90 bakteriofággal lizogenizálunk. 7. Az 1., 2. vagy 3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a lizogén organizmusként cl génben deléciót szenvedett organizmust alkalmazunk. 8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, az7.al jellemezve, hogy a gazdasejteket rekombináns klónozó plazmidként a pPR12, a pPR17 vagy a pPR18 plazmiddal transzformáljuk. 9. Eljárás stabilizálható heterológ dezoxi-ribonukleinsavat tartalmazó E. coli gazdasejtek előállítására, azzal jellemezve, hogy E. coli sejteket az 1. vagy 8. igénypont szerint előállított klónozó plazmiddal transzformálunk. 10. Eljárás a pPR12 plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a pPR3 plazmid 0,9 kb nagyságú Hincl!-Pstl restrikciós fraginensét és a pBR322 plazmid 4 kb nagyságú Pstl-HincII restrikciós fragmensét ligáljuk. 11. Eljárás a pPR17 plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a pPR12 plazmid 4,7 kb nagyságú JícoRI-BamHI restrikciós fragmensét és a plA7A4Al plazmid 1,3 kb nagyságú EcoRI-Bam- HI restrikciós fragmensét ligáljuk. 12. Eljárás a pí’R18 plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a p?R12 plazmid 4,7 kb nagyságú EcoRI-BamHl restrikciós fragmensét és a pIB7A4Al plazmid 1,3 kb nagyságú EcoRI-Bam- HI restrikciós fragmensét ligáljuk. 9 db rajz Kiadja az. Országos Találmányi I livatai A k iád fi sA rt felel; lliiner Zolid 1 osztályvezető Megjelent: A Műszaki Könyvkiadó gondozásában Antikva Kft. 17
