196998. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bázisosan helyettesített piridin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
13 196 998 14 Az 1. táblázat folytatása Példa r’ R2 R1 A Z n X Elkülönítve mint Olvadáspont °C 2<ú ; cii3 c..3 II-c2"r- xr 'N‘rU 0 co2ii 3 MCI 2 n2o 161 (bomljik) 29. Clt3 ^»3 11-C2"4-, jy N-CII ' X3ir 0 nh2 3 MCI 2 ll20 190-197 Farmakológiai vizsgálatok és eredmények 1. Az allergia-mediátorok elleni antagonisztikus hatás (narkotizált tengerimalacon) A találmány szerinti vegyületeknek a spazmogén aminok, hisztamin és bradikinin elleni gátló hatásának vizsgálatát a H. Konzett és R. Rössler által leírt kísérleti módszerrel hajtottuk végre (Arch. Exp. Path. u. Pharmak. 195 (1940), p. 71, összehasonlítva a technika állásához tartozó, a hörgő-görcsöt oldó piridin-sor legfontosabb képviselőjével, a 29 00 504 számú NSZK-beli közzétételi irat szerinti 4 - (2,6 - dimetil - 3 - nitro - 4 - piridil) - tiomorfolin - hidrokloriddal (1. példa). Ennél a kísérletnél hím tengerimalacnak hisztamint vagy bradikinint adunk be intravénásán (i.v.) uretán-narkózisban (1,25 g/kg i.p.), és az így előidézett bronchospazmust vizsgáljuk. A vizsgálati anyagokat vizes oldatban, intravénásán adjuk be 1 ml/kg mennyiségben. A gátló hatás megítélési kritériumaként az ED30- értékek illetve -tartományok szolgálnak, ezeken azokat a mg/kg dózisokat kell érteni, amelyekkel a kísérletileg előidézett görcs a nemkezelt kontroliállatokhoz képest a felére csökkenthető. 2. Allergia-mediátorok felszabadulásának gátlása (szővetsej tvédő hatás) a) Passzív kután anaftlaxia (PCA) patkányokon (PCA-teszt) A passzív kután anafilaxia IgE-ellenanyaggal kiváltott heveny allergiát (I. típus) képvisel. Ebben a modellben a szövetsejtekhez és bazofil granulocitákhoz kötött antitestek egy intravénásán alkalmazott antigénnel reagálnak az allergiamediátorok excesszív felszabadulása közben. Az így szabaddá vált hisztamint Evansblau egyidejű alkalmazásával a patkány borotvált lágyékán láthatóvá lehet tenni. A találmány szerinti vegyület szövetsejt-védő hatását a színintenzitás fotometrikus kiértékelésével határoztuk meg, orális beadás után, a mediátor-felszabadulás százalékos gátlását véve alapul, összehasonlítva a kezeletlen kontroli-állatokkal. Ehhez a * vizsgálathoz is bevontuk a 29 00 504 NSZK-beli közzétételi irat szerinti, az 1. példában említett vegyületeí, amely hatástalannak és ennélfogva allergiás megbetegedések terápiájához alkalmatlannak bi-30 ZODyultb) Calcium-Ionophor A 23187 alkalmazásával előidézett hisztamin-felszabadulás izolált patkdny-szövetsejtből Bizonyos anyagok, például Calcium-Ionophor A 23 187 és bázisos peptidek segítségével — hasonlóan az IgE-ellenanyaggal kiváltott immunreakcióhoz — a szövetsejtekből allergia-mediátorok excesszív 40 felszabadulása következik be, amiből a közegbe kerülő hisztamin viszonylag egyszerűen, mennyiségileg kimutatható. A találmány szerinti vegyületek szövetsejt-védő hatását patkány hashártya-szövetsej tjéből történő mesterségesen indukált hisztamin-felszabadulás gátlása révén határoztuk meg. Ehhez 104 sejtet szuszpendáltunk Clicks/RPMl (50:50, Vol., Fa. Serva, Heidelberg) szövetkultúrába, 15 percig a teszt-anyaggal inkubáltuk és végül 10~s g/ml kon- 50 centrációjú Calcium-Ionophor A 23 187 készítménnyel kezeltük. A felszabaduló hisztamint nagynyomású folyadékkromatográfia révén (HPLC) határoztuk meg. A gátló hatás mértékéül az IC50- értékek szolgáltak, amelyek azokat a moláris kon- 55 centrációkat (mól/1) jelentik, amelyekkel az indukált hisztamin-felszabadulás a felére csökken az elő nem kezelt sejtekhez képest. 10~5 mól/1 fölötti IC50-értékek terápiás szempontból irrelevánsak. Ennélfogva a 29 00 504. NSZK-beli közzétételi g0 irat 1. példája szerinti, összehasonlításhoz alkalmazott készítmény ebben a tesztben is inaktívnak bizonyult. A fenti 2. pontban leírt farmakológiai vizsgálati módszereket az alábbi szakirodalmi közlemények 65 ismertetik: 10
