196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 ‘H-NMR-spektrum (300 MHz, DMSO-cL, részleges spektrum): 2,62 (s, 3H, N-CHJ, 3?73 (s,3H), OCHJ, 3,37 (AB dublettek, 2Hf átfed a víz jelével), 4,48 (t, 1H), 7,51 (s, 1H, imidazolil H4), 7,98 (s, 1H), (imidazolil-H-1). ej lépés bl-(tercier-Butoxi-karbonil)-fenil-alanin-N-metil-hisztidjn-metil-észter 1.05 g az ej) lépésben leírt módon kapott N-metil-L-hisztidin-metil-észtert feloldunk diklór-metánban, és az oldathoz 0°C hőmérsékleten hozzáadunk először 1,25 ml trietil-amint, majd 1,14 g N-(tercier-butoxi-karbonil)-L-fenil-alanint, ezután 1,04 g 1- -hidroxi-benzotriazol-hidrátot, és végül 0,89 g diciklohexil-karbodiimidet. Az elegyet 0°C hőmérsékletére keverjük, majd 4—5 óra alatt hagyjuk lassan 20°C hőmérsékletre melegedni. Utána a reakcióelegyet további 10 órán át keverjük, majd a szilárd részeket kiszűrjük, és a szürletről az oldószert ledesztilláljuk. A maradéko.t feloldjuk 100 ml etil-acetátban, az oldhatlan részeket kiszűrjük, a szürletet kétszer 10 ml 1 normál nátrium-hidroxid-oldattal mossuk, és magnézium-szulfáton megszárítjuk. Ezután az oldószert ledesztilláljuk, ily módon majdnem fehérszínű szilárd anyag formájában 0,84 g terméket kapunk. Ezt a terméket etil-acetátból átkristályosítva színtelen, porszerű anyag formájában 0,47 gcím szerinti vegyületet kapunk. További terméket kapunk az alábbi módon: Az etil-acetátból átkristályosított terméket és a kiszűrt száritószert egyesítjük, metanollal melegítjük, és a kapott szuszpenziót lehűtjük. A szilárd részeket kiszűrjük, és a szürletről az oldószert ledesztilláljuk. A kapott szilárd anyagot szilikagélen kromatografáljuk, eluensként etanol és diklór-metán elegyét használjuk. Ily módon tiszta állapotban 0.857 g cím szerinti vegyületet kapunk, * H-NMR-spektrum (250 MHz, CDCI3, részletes spektrum): 1,39 (s, 9H, tercier-butoxi-karbonil), 280 (s, 3H, N-CHo), 2,90 és 3,03 (m), 3,35 (m, 1H), 3,70 (s, 3H, OCHJ, 4,75 (dt, 1H), 5,15 (dt, 1H), 5,3 (d, BOCNH), 6,84 és 7,68 (1-1H, imidazolil- CH), 7,1—7,4 (m, aromás). A 7,55-nél és 6,74-nél megjelenő szingulettek (imidazlil CH-jelek) arra utalnak, hogy a terméknek körülbelül 10%-a a második rotamer formában van. e,) lépés N-(tercier-Butoxi-karbonil)-fenil-alanin-N-metil-N-im-tercier-butoxi-karbonil-hisztidin 2,32 g, az e2) lépésben leírt módon kapott terméket feloldunk 70 ml aceton és 20 ml víz elegyében, az oldatot 0°C hőmérsékletre hűtjük, és hozzáadunk 5,4 ml 1 normál nátrium-hidroxid-oldatot. Az elegyet 3,3 órán át 0 C hőmérsékleten, majd további 15 órán át -20°C hőmérsékleten tartjuk. Ezután az oldatot részlegesenbetöményítjük, és a maradék vizes oldat pH-ját 1 normál sósavval 5,8-ra állítjuk. A szabad sav nem válik ki az oldatból, ezért az elegy pH-ját 6 normál nátrium-hidroxid-oldattal 11-re állítjuk, és térfogatát vízzel 30 ml-re egészítjük ki. A kapott oldathoz hozzáadunk 30 ml dioxánt, és 0°C hőmérsékleten hozzáadunk 1,61 ml di-tercer-butil-dikarbonátot, mégpedig oly módon, hogy eközben az elegy pH-ját 6 normál nátrium-hidroxid-oldat időnkénti adagolásával 9 és 11 között tartjuk. Az elegyet körülbelül 1 órán át 0 C hőmérsékleten tartjuk, majd a hűtő fürdőt eltávolítjuk és az elegyhez hozzáadunk további 0,5 ml di-tercier-butil-dikarbonátot. Negyedóra múlva az elegyet részlegesen betöményítjük, majd etil-acetáttal kirázzük. Az etíl-acetátos részt vízzel mossuk, majd a vizes részeket egyesítjük, tiszta etil-acetátot adunk hozzájuk, és az egész elegy pH-ját 0°C hőmérsékleten, 6 normál sósavval 1,4-re állítjuk. A szerves részt elválasztjuk, majd vízzel mossuk, nátrium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert le desztilláljuk. A kapott olajról homogenizálás céljából többször dietil-étert desztillálunk le, ily módon végül amorf, habos anyag formájában 1,9 g cím szerinti vegyületet kapunk, amely a fordított fázisú, nagyfelbontású folyadék-kromatográfiás vizsgálat szerint legalább 95%-os tisztaságú. ‘H-NMR-spektrum (250 MHz, CDCI3, részleges spektrum): 1,30 és 1,35 (s, összesen 9H, tercier-butoxi-karbonil-csoport a rotációs izomerekben), 1,60 és 1,69 (az imidazolgyűrű nitrogénatomjához kapcsolódó tercier-butoxi-karbonil-csoport jelei az egyes izomerekben, összesen 9H), 2,82 és 2,98 (s, összesen 3H, N-CHj, 3,32 és 3,10 (AB d, 1 — 1H), 4,83 (dt, 1H), 5,27 (m, 1H), 5,42 és 5,48 (d, összesen 1H, Boc-NH), 7,1—7,35 (m, aromás), 7,93 és 8,08 (s, összesen 1H, imidazolil-H-2). ej lépés (N-a-/tercier-Butoxi-karbonil-fenil-alanin/-N-im-/-tercier-butoxi-karbonil/-N-metil-hisztidin)-ciklosztatin-/N-epszilon-benziloxi-karbonil-lizin/-fenil--alanin-benzil-észter 3.0 ml diklór-metánban 0°C hőmérsékleten, egymás után, az alábbi sorrendben feloldunk 0,976 g (1,37 mmól), a d) lépésben leírt módon kapott' ciklosztatin-(N-epszilon-benziloxi-karbonil-lizin)-fenil-alanin-benzil-észter-hidrokloridot, 0,799 g (1,55 mmól), az lépésben leírt módon kapott N-(tercier-butoxí-karboniI)-fenil-aIanin-N-metil-N-im-tercier-butoxi-karbonil-hisztidint, 0,310 g (1,55 mmól) diciklohexil-karbodiimidet, 0,247 ml trietil-amint és 0,378 g (2,47 mmól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és az elegyet 20 órán át 0°C hőmérsékleten keverjük. Utána a reakcióelegyet az a) lépésben leírt módon dolgozzuk fel, iLy módon fehérszínű habos anyag formájában 0,930 g terméket kapunk. ‘H-NMR-spektrum (250 MHz, DMSO-dg, részleges spektrum): 1,24,1,28 és 1,32 (s, összesen 9H), tercier-butoxi-karbonil-csoport jelei az egyes izomerekben), 1,44, 1,48 és 1,52 (s, összesen 9H, az imidazolgyűrű nitrogénatomjához kapcsolódó tercierbutoxi-karbonil-csoport jelei az egyes izomerekben), 276, 2,96 és 3,02 (s, izomer N-CHj, 2,90 (m, 2-4H), 3,82, 3,86. 4,52, 4,80 (m, 1-1H), 4,95-5,10 (m, 4H, CHJ, 7,15-7,45 (m, aromás) 7,72, 7,84, 8,45 (m, 1-TH), 8,04 és 8,10 (s, összesen 1H, imidazolil H-2). 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 14
