196624. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Nagy specifikus aktivitású kimopapain előállítására
3 196 624 4 A készítmény jellemzésére megadtuk azt a fenti reakcióelegyben 340 nm-nél 25 °C-on 1 perc alatt bekövetkező extinkcióváltozást, amit 1 mg kimopapain/ml reakcióelegy okoz. Az enzim specifikus aktivitása: 62. 2. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy nagyobb átmérőjű oszloppal (5X100 cm) dolgozunk. Specifikus aktivitás: 70. 3. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy rövid és gyors oszlopot (10X16 cm) használunk. Itt a bárium-kloriddal csapadékot adó szennyező fehérje nem különül el a kimopapaintól. Specifikus aktivitás: 42. 4. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy a gélkromatográfiás pufferből kihagyjuk az 1 mM ciszteint. Specifikus aktivitás: 51. 5. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy a nyers kimopapaint töményebben okijuk, ügy, hogy az oldat fehérjetartalma 5 %-os (tömeg/térfogat) legyen. Specifikus aktivitás: 55. 6. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy az izolálást szobahőmérséklet helyett 2-10 °C között végezzük. Specifikus aktivitás: 65. 7. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy Sephadex G-25 helyett Sephadex G-50 oszlopon végezzük a kromatográfiát. Specifikus aktivitás: 53. 8. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy a 3 mM foszfát helyett 10 mM foszfát puffert használunk. Specifikus aktivitás: 63. 9. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy a pH 6,5-es foszfát puffer helyett 5,5-es acélát puffert használunk. Specifikus aktivitás: 67. 10. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy az 1 mM cisztein helyett 5 mM ciszteint használunk. Specifikus aktivitás: 64. 11. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy az aktív anyagot tartalmazó frakcióhoz (A csúcs) annyi ciszteint adunk, amennyi c jelenlevő fehérje 10 %-a (tömcg%). Specifikus aktivitás: 63. 12. példa Az 1. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy cisztein helyett nátrium-szulfit redukálószert használunk. Specifikus aktivitás: 60. 13. példa Az I. példa szerinti eljárás, azzal a különbséggel, hogy mindhárom kromatográfiás csúcsból 1 ml mintát veszünk és mindegyikhez előbb 0,2 ml 1 N sósavat, majd 0,2 ml 12 %-os bárium-kloridot adunk. Csapadékot csak a B csúcs esetében kapunk. 14. példa Referenciamérés: A „ChimodiactinR” (Smith Laboratories, Inc. USA) készítmény specifikus aktivitása az 1. példában megadott módszerrel mérve: 28. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás kimopapain előállítására nyers kimopapainból, azzal jellemezve, hogy a nyers kimopapaint redukálószer jelenlétében vízben vagy pufferben feloldjuk, a tiszta felülúszót gélkromatografáljuk, majd az aktív enzimet tartalmazó frakciókat gyűjtjük és fagyasztva szárítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy redukálószerként ciszteint, merkaptoetanolt vagy nátrium-szulfitot alkalmazunk. 3. Az. 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy puffcrkénl pl I 5 és 7 közötti foszfát vagy acetát puffert használunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kromatográfiás oszlopként előnyösen Sephadex G-50 vagy Sephadex G-25 oszlopot alkalmazunk. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmazott oszlop hosszának és át&iérőjének aránya 5—50:1, előnyösen 20:1. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fagyasztva szárítást előnyösen -40 °C-on 6.665 Pa kákuumbnn végezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 1 db ábra 3
