196607. lajstromszámú szabadalom • Eljárás didezoxi-nukleozidok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
11 196 607 12 7. példa Pesszárium előállítása mg/pesszárium Hatóanyag (63 millimikronos) 250 Vízmentes dextróz 380 Burgonyakeményítő 363 M agnézium-sztearát 7 1000 A fentiekben felsorolt komponenseket közvetlenül összekevertük, és az így kapott keveréket közvetlenül pesszáriumokká préseltük. 8. példa 2,6-Diamino-purin-9-(ß-0-2’ ,3’ -didezoxi-ribofuranozid) előállítása 1,39 g (9,26 mmól) 2,6-diatnino-purin és 1 g (4,42 mmól) 2’,3’-didezoxi-timidin 50 ml ionmentesített vízzel készült, 0,4 ml 1 mólos dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot tartalmazó szuszpenziójának a pH értékét 0,1 mólos kálium-dihidrogén-foszfát-oldat hozzáadásával 7,6-ra állítjuk, utána hozzáadunk 1340 NE Escherichia coli-ból származó tisztított purin-nukleozid-foszforiláz és 4450 NE timidin-foszforiláz [Krenitsky és munkatársai: Biochemistry, 20, 3615 (1981); 4 381 344. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás] enzimet és az így kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten 18 órán át keverjük, utána 2225 NE timidin-foszforilázt adunk hozzá, és 2 napig keverjük, majd szűrjük, és a szűrletet -20 °C hőmérsékleten tartjuk. Felolvasztás után a szuszpenzió pH értékét tömény ammónium-hidroxid-oldattal 10,6-ra állítjuk, és 2,5X9 cm méretű Dowex-1- formiát gyantából készült oszlopon kromatografáljuk; és az eluáláshoz vizet alkalmazunk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot vízből átkristályosítjuk. így 0,476 g cím szerinti vegyülethez jutunk, amely 0,5 mól kristályvizet tartalmaz, olvadáspontja: 192 °C. Hozam: 20%. Elemanalízis a Ci0Hi4N6O2 • 0,5 H20 összegképlet alapján: C% H % N % számított 46,33 5,83 32,41 talált: 46,27 5,83 32,39 9. példa 2-Amino-purin-9-(ß-D-2' ,3’ -didezoxi-ribofuranozid) előállítása 1 g (4,42 mmól) 2’,3’-didezoxi-timidin és 1,18 g (8,73 mmól) 2,-amino-purin 50 ml ionmentesített vízzel készült, 0,4 ml 1 mólos dikálium-hidrogén-foszfátoldatot tartalmazó szuszpenziójához, melynek pH értéke 7,8, 2680 NE purin-nukleozid-foszforilázt és 4500 NE timidin-foszforilázt teszünk, és a reakcióclcgyct 35 °C hőmérsékleten 2 napon ál keverjük, majd további 2225 NE timidin-foszforiláz-enzimel adunk hozzá, még egy napot keverjük, a szilárd anyagot leszűrjük, és a szűrletet —20 °C hőmérsékleten tartjuk. Felolvasztás után a szilárd anyagokat eltávolítjuk, és a fentiekben kapott, eredeti nucstortáva! egyesítjük. A szűrlet pH értékét tömény ammóniumhidroxid-oldattal 10,5-re állítjuk, majd 2,5X15 cm méretű Dowex 1 -formiát oszlopon kromatografáljuk. A terméket a gyantáról vízzel eluáljuk. Forró vízből való átkristályosítás után kis mennyiségű 2-amino-9-(0-D-2’,3’-didezoxi-ribofuranozid) különíthető el. A reakcióból származó többi szilárd anyagól 25 ml vízzel fonásig hcvíljiik, és szűrjük. E szíírletet egyesítjük a fenti oldatokkal, bepároljuk, és az így kapott szilárd anyagot vízből átkristályosítjuk. A kristályokat a fentiek szerint kapott kristályos termékkel egyesítjük. így 0,426 g cím szerinti vegyülethez jutunk, amely 0,5 mól kristályvizet tartalmaz, olvadáspontja: 162 °C. Hozam: 20 %. Elemanalízis a CioH,3N502 • 0,5 1I20 összegképlet alapján: C% H% N kiszámított: 49,17 5,78 28,67 talált: 48,97 5,80 28,67 10. példa 6-Metoxi-purin-9-(ß-D-2' ,3’ -dedezoxi-ribofuranozid) előállítása 1,23 g (8,2 mmól) 6-metoxi-purin és 1,0 g (4,5 mmól) 2’,3’-didezoxi-timidin 50 ml 30 mmólos, 7,1 pH értékű kálium-foszfát-oldat fal alkotott szuszpenziójához 1984 NE purin-nukleozid-foszforilázt és 7892 NE timidin-foszforilázt adunk, és az elegyet 37 °C hőmérsékleten 6 napon át inkubáljuk. Ezután szűrjük, és a szűrletet -20 °C hőmérsékleten tartjuk. Felolvasztás után a szilárd részt szűréssel eltávolítjuk, és egyesítjük az eredeti szűrőkaláccsal. A szűrlet pH értékét tömény ammónium-hidroxid-oldattal 10,6-ra állítjuk, és Dowex—1-formiát oszlopon (mérete 2,5X10 cm) kromatografáljuk. A terméket a gyantáról vízzel eluáljuk. A vizet vákuumban ledesztilláljuk, a terméket 30 térfogat %-os n-propanolban oldjuk, és 5X90 cm méretű BioRad gyártmányú P—2 gyantából készült oszlopon kromatografáljuk. A terméket az oszlopról 30 térfogat %-os vizes n-propanol-odattal eluáljuk, és az oldószer eltávolítása után 0,477 g cím szerinti vegyülethez jutunk, olvadáspontja: 157— 165 °C. Hozam: 23%. Elemanalízis a CjjH^^Oa összegképlet alapján: C% H % N % számított: 52,79 5,64 22,39 talált: 52,57 5,70 22,32 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
