196605. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dihidropiridin-5-foszfonsav ciklusos propilén-észter származékainak előállítására
9 19G 605 10 3. hatásvizsgálati példa: Vérnyomáscsökkentő hatás Oldatokat készítünk egyfelől a 15. előállítási példa szerint készített -y-kristályformájú vegyülettel, másfelől az ellenőrző vegyületként alkalmazott Nikardipinhidrogén-kloriddal; az oldószer PEG 400 és víz 2:1 térfogatarányű elegye. A hatóanyagmintákat orálisan beadjuk hímnemű spontán hipertcnzív patkányoknak (SHR), testsúlykilogrammonként 10 mg-nyi hatóanyagadaggal. Az 1.2. hatásvizsgálati példaként ismertetett módon vizsgáljuk a vérnyomáscsökkentő hatást, azzal az eltéréssel, hogy a szisztolés vérnyomás méréséhez a Riken Kaihatsu által készített PS 100 típusjelű készüléket alkalmazzuk és hatóanyagadagonként 8 patkányból álló csoportokat vizsgálunk; a szisztolés vérnyomást egyébként egyező módon (tail-cuff) mérjük, mégpedig a beadás előtt, majd a beadást követő 2, 4, 6, 8, 10 és 24 óra eltelte után. Az 1. ábra szemlélteti a 15. pld. szerinti, 7-kristályformájú vegyidet (továbbiakban: A vegyidet), illetve a Nikardipin-hidrogén-klorid ellenőrző vegyület vérnyomáscsökkentő hatását. Látható, hogy az A vegyület vérnyomáscsökkentő hatása lassabban indul, de hosszantartóan nagyobb a hatása, mint az ellenőrző vegyiileté. 4. hatásvizsgálati példa: Érszelektivitás 4.1. Az érrendszeri simaizmokra gyakorolt hatás 50 mM kálium-kloriddal kontrakciót indukálunk nyúl mellkasi főütőerének szalagjában és vizsgáljuk egyfelől az A vegyülettel, másfelől Nifedipin-nel, illetve Nifedipin-hidrogén-kloriddal elérhető véredénytágító hatást. Azt tapasztaljuk, hogy az A vegyület hatása jóval lassabban indul, s ugyancsak igen lassú az A vegyülettel előidézett véredény tágító hatásból való visszaállás, miután a szalagokat K*-ban dús oldatta! kimostuk. További lépésben a szalagokat pre-inkubáljuk a vizsgált hatóanyaggal, mielőtt K+-ban dús oldatban CaCl2-dal kontrakciót indukálnánk bennük és vizsgáljuk a pre-inkubáció kontrakciót inhibitáló hatását az A vegyület, Nifedipin és Nifedipin-hidrogén-klorid esetében. A pre-inkubáció időtartamának megnövelése az A vegyület esetében megnövelte az inhibitáló hatást. A 3. táblázat mutatja a mért pA2 értékeket. 3. táblázat A mért pA2 értékek a vizsgált hatóanyagokkal Vegyület végzett pre-inkubáció időtartamának függvényében 1 óra 3 óra 6 óra A vegyület 8,63 9,17 9,33 Nifedipin 8,60 Nifedipin-HCl 9,68 - 9,70 A 3. táblázat adatai alapján a következők állapíthatók meg. Az A vegyület erős kalcium antagonista hatást fejt ki az érrendszeri simaizmokra, s várható, hogy az értágító hatást illetően az A vegyületnél megfigyelt nagyon lassú indulás és a nagyon lassú visszaállás e szer vérnyomáscsökkentő hatásában is lassú indulást és hosszantartó hatást eredményez. 4.2. A szívizomra gyakorolt hatás Ilim tengerimalac szívpitvarát használjuk. A jobb pitvart szabadon hagyjuk, a bal pitvart villamosán gerjesztjük. A 4. táblázat mutatja a szívciklus (HR) %-os csökkenését a jobb pitvarban és a kontrakciós erő (CF) %-os csökkenését a bal pitvarban, a hatóanyagminta alkalmazását három órával követően. 4. táblázat Szívciklus Kontr. erő Vegyület Adag Csökk. Adag Csökk. (M) [%] (M) [%] A vegyület IO'9 io-8 11,6 60,4 io~6 23,1 Nikardipin-HCl !0-9 11,3 10'7 43,5 10'8 50,0 !0~6 80,2 A fenti vizsgálati eredmények alapján a következő állapítható meg. 1. Az A vegyidet negatív kronotrópos hatásának szintje közel megegyezik a Níkardipin-llCi hatékonyságával. Ugyanakkor az A vegyület negatív inotrópos hatásának szintje több mint 10-szeresen kisebb, mint a Nikardipin-HCI-é. 2. Az A vegyületnek nagy az érszelektivitása és szinte semmilyen hatást nem fejt ki a szív kontrakciós erejére. 5. hatásvizsgálati példa: Mérgező hatás Négy hetes ddY törzsbeli hím egereket (továbbiakban: ddY egerek) és hat hetes hím Sprague-Dawley törzsbeli patkányokat (továbbiakban: SD patkányok) alkalmazunk. A hatóanyagmintákat 0,5 %-os metilcellulóz oldatban szuszpendáijuk és mind az egereknek, mind a patkányoknak orálisan adjuk be. 7 nappal a beadás után vizsgáljuk az állatok állapotát. Az eredményeket az 5. táblázat mutatja. Az 5. táblázatból látható, hogy az A vegyület mérgező hatása jóval kisebb, mint a Nikardipin-HCI-é 5 10 15 20 25 30 35 10 45 50 55 60 65 6
