196460. lajstromszámú szabadalom • Eljárás homogén immun interferon fragmens és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

20

196460

21

talmazó keverékből az alábbi, további eljárásokkal homogenitásig tisztítjuk. Monoklonális antitest affinitás oszlopon tisztított szonifikációs felülúszóL (fehérje 10,3 mg; fajlagos aktivitás 0,9 x 106 E/mg (SDS-PAGE gél elek- 5 troforézisBel) 16 oszlop gél; akrilamid 12,5 súly%; SDS 0,1%; vastagság 3-5 mm) tovább tisztítunk. A gél egy részét előbb Coonuissie Brilliant Blue R-250 színezékkel megfestjük, majd 10% ecetsavai tartalmazó

6.

15%-os metanollal szinteleniljük. A gélen levő 15K sávokat a többi rész mellől kivágjuk, öszszetöl'jük és 0,1%-os SDS-ben 4 °C-on két napon át keverjük.

Az oldatot szűrőpapíron átszűrjük. A szűrletet liofílizáljuk, majd 6 térfogat elariollal egyesítjük. A kiváló csapadékot 0,1% SDS-ben oldva a homogén 15K monomer komponens oldalát kapjuk (fehérje 1,1 mg; fajlagos aktivitás 0,3 x 10® E/mg).

táblázat riFN-y tisztítása

10

Tisztítási

lépés

összfehérje

Teljes

aktivitás

Fajlagos

aktivitás

Tisztítás

Kitermelés

mg

egység

egység/mg-szoros

%

I. Guanidines extrakció

Felülúszó

2.806

2.5 x 10*

9 x 10*

_

100

Kovasav

98

1.0 x 10*

1 x 10«

ii

10

Monoklonális

antitest

8

0.8 x 10*

1 x 107

110

32

17. Szőnifikáeió

Felülűszó

6.130

8.0 x 107

1.3 x 10'

100

Kovasav

87

4.5 x 107

5.2 x 10«

400

56

Monokonális

antitest

2

2.0 x 107

1.0 x 107

769

25

7.

táblázat

8. táblázat

A 15K és

18K

rIFN-v aminosav-összetétele

(maradék-számok)

40

A 15K és 18K

CNBr C-lerminális peptidjei

18K (1■-ld6) 15K (1-131)

15K

18K

Asp

20.9

(201

19.9

(20)

Thr

0,9 (11

Thr

5.1

(5)

4.9

(5)

45

Ser

1,1 (1)

0,84 (1)

Ser

9.8

(11)

6.7

(9)

Glu

1,1 (1)

1,1 (1)

Glu

18.5

(18)

15.1

(16)

Pro

» 111

Pro

*

(2)

*

(2)

Gly

1,5 (1)

1,3 (1)

Gly

5.9

(51

5.6

(4)

Ala

2,4 (31

1,1 (1)

Alá

8.2

(8)

7.3

(7)

50

Leu

1,0 (1)

1,1 (1)

Cys

*

(2)

*

(2>Phe

1,0 (1)

Val

9.1

(8)

9.1

(8)

Lys

1,9 (2)

2,8 (3)

Met

4.8

(4)

3.8

(3)

Helyzetek a

Ile

7.2

(7)

6.6

(7)

szekvenciában

121-131

138-146

heu

10.5

(10)

9.6

(9)

55

Tyr

5.5

(5)

4.8

(5)

A zárójelben levő számok a

DNS szekvencia

Phe

10.3

(10)

8.2

(9)

várható maradékok számát jelentik.

His

1.8

(2)

2.5

(2)

bys

19.9

(20)

16.9

(19)

*az értékeket nem határoztuk

Arg

8.6

(8)

5.6

(3)

60

A leírásban szereplő irodalmi utalásokat

Trp

*

(1)

*

(1)

az alábbiakban

részletezzük:

A zárójelben levő számok a DNS szekvencia 1. Gray, P.W,, el ai., Nature 285,

503-508

alapján várható maradékok számát jelzi. (1982)

*az értékeket nem határoztuk meg. 65

12