196459. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neomycin előállítására
6 196459 7 3. táblázat Optimális összetételű táptalajokon elérhető fermentációs szintek (Mg/ml) Oldott oxigénszint Táptalaj jele NF-12 kevésbé konc. NF-6 közepesen konc. NF-8 legkonc. 2-10% 12.900 9.800 8.200 60-70% 16.100 19.300 18.300 90-100% 16.900 21.000 22.900 Kísérleteink sorén azt is megállapítottuk, hogy kedvezőtlen technikai feltételek között a telítési oldott oxigénszint kis mértékben növelhető oly módon is. hogy a táptalaj keményitótartalmét enzimesen vagy 20 ásványi Bavas bontással elfolyósitjuk, és ezáltal a táptalaj viszkozitásét csökkentjük. A keményítő bontását olyan mértékben célszerű megvalósítani, hogy a képződött redukáló cukor értéke ne haladja meg a kiin- 25 dúló redukáló érték 5-6 szorosát. Tapasztalataink szerint ennél nagyobb mértékű bontás ugyanis mér a fermentációs hozam csökkenését eredményezi: 30 Redukáló érték % Hatóanyagtartalom /ug/ml 0.35 (bontatlan) 1.70 3.00 4.50 22.400 22.200 19.100 15.000 35 A találmány szerinti eljárás kiviteli módját az alábbi példákban ismertetjük. 40 A szilárd kultúrából 5 • 109 számú spórával inokulum fermentációs táptalajt oltottunk. Az inokulum fermentációs táptalaj összetétele a következő volt: Burgonyakeményitő 2.5% Szójaliszt 2.5% CaC03 0.8% NaCl 0.4% (NH4)2S04 0.5% KH;:P04 0.04% Pál maolaj pH a sterilezés előtt: 7,00 Sterilezés 121 °C-on 45’-ig pH a stei'ilezés után 6,80-7,00 0.5% Az inokulált táptalajt 240-260 fordulat/perc sebességgel mozgó 3,2-3,4 cm kitérésű sikszita-elven működő rázóasztalon 100 ml/500 ml-s Erlenmayer tenyésztő lombikokban 32 °C-on 18 óráig rázattuk. Az inokulum fermentációból a fófermentációs táptalaj térfogatára számolt 10%-nyi mennyiséget oltottunk át a főfermentációs táptalajba, melynek összetétele a következő volt: 1. példa Az NR-8/51 jelű MNG-00313 sz. alatt deponált törzsből 5 cm2 felületű szilárd táptalajon spórás tenyészetet állítottunk elő oly módon, hogy a tenyészetet 32 °C-on 192 óráig inkubáltuk. A táptalaj összetétele: Corn Steep Liquor (100%-os) 0.1% Burgonyakeményitő 1.0% NaNOa 0.3% NaCl 0.3% CaC03 0.3% agar-agar . 3.0% pH a sterilezés előtt: 7.00 Sterilezés 121 °C-on 30’-ig pH a sterilezés után 6.80 Kukorica-finomliszt (keményítőtartalma: 80%) 7.5% Szójaliszt 6.0% Glükóz 2.0% CaC'03 0.25% Pál maolaj 0.1% pH a sterilezés előtt: 6,8 Sterilezés 125 °C-on 45’-ig pH a sterilezés után 6,7-6,9 A beoltott főfermentációt 240-260 fordulat/perc sebességgel mozgó 3,2-3,4 cm kité- 55 résü sikszita-elven működő rázóasztalon 500 ml-s Erlenmayer tenyésztő lombikokban, lombikonként 35 ml fermentlével 32 °C-on 168 óráig tenyésztettük. A neomycin-képződése a következő volt: 60 5
