196455. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású peptideket adó transzformánsok előállítására
16 196455 17 terméket megfelelően átmossuk vízzel, dioxán-víz keverékkel és metanollal, majd csökkentett nyomáson, 100 °C hőmérsékleten megszáritjuk. 3. lépés A. E-Z-lizin 10 g nátrium-hidrogén-karbonátot és 12 ml Z-kloridot adunk négy részletben 10 perces időközönként 11 g L-lizin rézsóhoz, jeges fürdőn keverve, és további 3,5 óra hosszat keverjük. Az igy nyert csapadékot kiszűrjük, és egymás után vizzel, etanollal és aceton/dietil-éter keverékkel mossuk. A csapadékot 250 ml vízben szuszpendáljuk és 412 ml 6 n vizes sósavval oldatba visszük. Ezután kénhidrogén-gázt buborékoltatunk át az oldaton egy-két óra hosszat. Az így nyert réz (Il)-szulfidot Hyflesupercel (Wako Junyaku Kogyo K. K., Japán) segítségével kiszűrjük. A szűrőpogácsát 1 n vizes sósav-oldattal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük és levegőt buborékoltatunk át rajta a kénhidrogén eltávolítása érdekében. Ezután az oldat pH-ját 6,5-re állítjuk be koncentrált vizes ammóniával jégfürdóben, és hűtőben hagyjuk állni mintegy 2 óra hosszat. A keletkezett csapadékot szűréssel elkülönítjük és vizzel, majd etanollal, végül dietil-éterrel mossuk. Ilyen módon végül 10 g E-Z-lizint nyerünk, amelynek olvadáspontja 254 °C. A kitermelés 65%. Átkristályositást végzünk híg sósav-oldatban oldva, majd vizes ammóniaoldattal semlegesítve. B. G-N02-arginin 120 ml füstölgő salétromsav és 75 ml füstölgő kénsav keverékét jéggel hűtjük, és 110 g L-arginin-hidrokloridot adunk kis részletekben a keverékhez keverés közben. További 45 ml koncentrált kénsavat adunk a keverékhez keverés közben. A keveréket további 1 óra hosszat keverjük, jégdarabok közé öntjük és az oldat pH-ját koncentrált vizes ammónia-oldattal 8-ra állítjuk be. Ezután a keverék pH-ját 6-ra állítjuk be ecetsavval és hűtőszekrényben hagyjuk állni mintegy négy órán át. A kapott csapadékot kiszűrjük és forró vízből átkristályosítjuk. Ezután a kristályokat etanollal, majd dietil-éterrel mossuk, végül száritjuk. Ilyen módon 60 g G-N02-arginint nyerünk, amelynek olvadáspontja 251 °C. A kitermelés 50%. C. imBzl-hisztidin 20 g L-hisztidin-hidroklorid. H20-t feloldunk 200 ml, szérazjég-aceton fürdőben - 30 °C-ra hűtött folyékony ammóniában. Ezután keverés közben nátrium-fém darabokat adunk az oldathoz, amíg az oldat kék színe tartós marad. Kis mennyiségű hisztidint adunk az oldathoz, amig a kék szín eltűnik, majd benzil-kloridot adagolunk cseppenként az oldatba. A keveréket 30 percig keverjük, majd először atmoszférikus nyomáson és szobahőmérsékleten, majd vizsugárszivattyúval előállitott csökkentett nyomáson pároljuk be, az ammónia eltávolítása érdekében. Az igy nyert maradékot 100 ml jeges vízbe öntjük. A keveréket dietil-éterrel extraháljuk és az oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk. Az így nyert oldatot pH 8-ra állitjuk be hig kénsavoldattal és állni hagyjuk hűtőszekrényben három órán ót. A csapadékot szűréssel kinyerjük és 70 súly%-os vizes etanolból átkristályosítjuk. A művelet eredményeképpen 13 g imBzl-hisztidint nyerünk, amelynek olvadáspontja 248 °C. A kitermelés 50%. D. O-Bzl-szerin 237 g acetil-L-szerint oldunk fel 235 ml 5 n vizes nátrium-hidroxid oldatban, majd az oldat pH-ját 7,3-ra állítjuk be. 25 ml 0,1 mólos citrét pufferben (pH 6,7, és adalékként kalcium-kloridot is tartalmaz, amelyre nézve 0,025 mólos) oldott 4 g Takadiasztázt (Sankyo Co., Ltd., Japán) tartalmazó oldatot adunk hozzá, majd miután néhány csepp toluolt adtunk az oldathoz, a keveréket 10 napon át állni hagyjuk 36 °C-on, amikoris csapadék képződik. A csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet koncentráljuk, és acetont öntünk a szürletbe, ilyen módon kristályokat nyerve. 100 g O-Bzl-szerint nyerünk. Ehhez hasonló módon nyerhetünk 100 g O-Bzl-treonint is 240 g acetil-L-treoninból. E. O-Bzl-tirozin 1,8 g L-tirozint és 1,2 g 5 kristályvizes réz (II) szulfátot szuszpendálunk 5 ml 2 n vizes nátrium-hidroxid oldatban és 10 ml vízben, és két óra hosszat keverjük. A szuszpenzióhoz 60 ml metanolt adunk, majd fokozatosan 1,2 ml benzil-bromidot és 0,7 ml 2 n vizes nátrium-hidroxid oldatot. 15 perc múlva 0,3 ml benzil-bromidot és 0,8 ml 2 n vizes nátrium-hidroxid oldatot adagolunk. A keveréket 1 óra hosszat keverjük, majd szűrjük. A kapott csapadékot metanol-viz (1 : 3) keverékkel mossuk. 2 g O-Bzl-tirozín réz-sót nyerünk. Ezt az O-Bzl-tirozin rézsót 20 ml 1 n vizes EDTA oldattal dörzsmozsárban törővei összekeverjük, a keveréket szűrjük, a szürópogócsát vizzel mossuk. A terméket kevés EDTA-t tartalmazó forró vízből átkristályosítjuk. 1 g O-Bzl-tirozint nyerünk, amelynek olvadáspontja 223 °C. A kitermelés 30%. F. S-Bzl-cisztein 157 g L-cisztein hidrokloridot 2 liter 2 n vizes nátrium-hidroxidban feloldunk. Jég5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
