196452. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikrobiológiai úton előállított alfa- és béta-interferonok, ezeket kódoló DNS-szekvenciák, genetikai információt tartalmazó mikroorganizmusok előállítására
22 196452 23 plazmid-DNS-el hibridizáltuk, végül elvégeztük az autoradiogréfiát. Az 5. ébrén mutatjuk be a rekombináns DNS molekukákból származó, találmány szerint előállított, két DNS inszertum restrikciós térképének sematikus összehasonlítását. A P1A6 és 1F7 plazmid DNS-inszertumai az IFN-ol-DNS két különböző szubtipusával mutatkoztak homológnak. A 6. ábra két IFN-aC-DNS speciíicitású inszertum (P1A6 és 1F7 klón) 3’- és 5’- végén lévő szegmentumának nukleotid szekvenciáját ábrázolja. Az aláhúzott ATG szekvencia a transzláció iniciációs kodonja. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás alfa2(Arg)-interferon bioszintéziséhez a genetikai információt a pBR322 plazmid Pstl-inszertumában tartalmazó pBR- 322(Pst) 1F7 jelű hibrid plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy Sendai-virussal indukált Namalwa-sejtekből elkülönített RNS-sel szintetizált cDNS-t a pBR322 plazmidba beépítjük, a plazmiddal valamely Escherichia coli mikroorganizmust transzformálunk, az igy előállított klóntárból izotóppal jelzett 5 5’-dCCTTCTGGAACTG-3’ szekvenciájú tridekanukleotiddal hibridizálás révén ezt a tridekanukleotidot tartalmazó és LelFN-B-t, C-t, D-t, F-et és G-t kódoló kiónt meghatározzuk, majd az alfa2(Arg)-interfe- 10 ront kódoló kiónt a fenti klón cDNS-inszertjével való hibridizálással kiválasztjuk. 2. Eljárás az alfa2(Arg)-interferon bioszitéziséhez a genetikai információt a pBR322(Pst) 1F7 hibrid plazmidban tartalmazó 15 Escherichia coli mikroorganizmus és mutánsai előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított plazmiddal Escherichia coli sejteket transzformálunk. 3. Eljárás alfa2(Arg)-interferon elóállitá- 20 sára, azzal jellemezve, hogy a 2. igénypont szerint transzformált Escherichia coli törzset vagy mutánsát tenyésztjük, és az alfa2(Arg)interferont a tenyészközegből elkülönítjük. 4. Eljárás a 120 C CTG GCA CAG ATG AGG AGA ATC TCT CTT TTC TCC 153 TGC TTG AAG GAC AGA CGT GAC TTT GGA TTT CCC CAG GAG GAG 195 TTT GGC AAC CAG TTC CAA AAG GCT GAA ACC ATC CCT GTC CTC 237 CAT GAG ATG ATC CAG CAG ATC TTC AAT CTC TTC AGC ACA AAG 279 GAC TA TCA TCT GCT GCT TGG GAT GAG ACC CTC CTA GAC AAA TTC 321 323 képletű részszekvenciát tartalmazó DNS elóál- 35 pont szerint előállított pBR322(Pst) 1F7 jelű litáséra, azzal jellemezve, hogy az 1. igény- plazmidból a DNS-t kiválasztjuk. 6 rajz A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 89.1252.66-4 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Benkő István vezérigazgató 13
