196435. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pankreatin kinyerésére
3 196435 4 A találmány tárgya új eljárás pankreatiri kinyerésére. Pankreatinnak nevezzük a hasnyálmirigyből extrahált enzimelegyet, ami lipáz, amiláz és proteáz enzimekből áll. A pankreal.int a hasnyálmirigy-elégtelenségen alapuló emésztési zavarok kezelésére alkalmazzuk. Kiindulási anyagként főleg a friss vagy fagyasztott sertéshasnyálmirigy szögéi, amiből eredetileg csak a vizet és a zsírt távolították el. Az enzimek érzékenysége miatt azonban ezt csak nagyon óvatosan lehet elvégezni. A jelenleg szokásos eljárások szerint a szárítást és a zsírtalanítást olyan oldószerekkel hajtjuk végre, amelyek a vizet is és a zsírt is oldják, például acetonnal vagy nagyobb szénatomszámú alkoholokkal. Más ismert. eljárások szerint a két folyamatot egymás vitán hajtjuk végre, többnyire előbb a szárítást (liofilizálás), majd illékony zsiroldószerekkel a zsirtalanitást; vagy fordítva, előbb folyékony fázisban a zsirtalanitást (halogén )-szénhidrogénekkel, és azután a folyékony fázis szárítását. Mindegyik pankreatinkészitménynek amelyek ezekkel az eljárásokkal készültek - megvan az a hátránya, hogy bennük a proteázok, például a tripszin és a kimotripszin nem szabad állapotban, hanem inaktív enzimogén formában vannak jelen. Ezért éppen azoknál n betegeknél, akiknek nincs saját enterokináz termésük, ezek az enzimogén formák nem aktiválódhatnak, és így ezek a pankreatinkészitmények számukra teljesen hatástalanok. További hátránya ezeknek a pankreatinkészitményeknek a rosttartalmuk, ami a mirigy kötőszövetéből származik és orvosilag értéktelen. Ez a rosttartalom a galenikus készítménynél nemcsak a préseléses eljárási zavarja, hanem a hatás helyén a készítmény kívánatos szétesését is akadályozza, ezáltal az enzimek nagy része kihasználatlanul marad. Néhány újabb eljárásnál ezeket az ismereteket már figyelembe vették. A rostokat eltávolítják és, hogy aktív enzimet kapjanak autolizist hajtanak végre. Azonban az autolízis az enzimeket nemcsak szabaddá teszi, hanem károsítja is. így ezeknél az eljárásoknál teljes enzimkinyerést nem lehet elérni. Az autolizist nagyon különböző módon hajthatjuk végre. A 3 223 594 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban például az autolizist 2 óra hosszat végzik szobahőmérsékleten, sok víz jelenlétében, a 2 620 289 és 2 716 719 számú német szövetségi köztársasági nyilvánosságra hozatali irat szerinti eljárásoknál 15 óra hosszat, 15 °C-on illetve 4 óra hosszat, 15 °C-on, vízzel nem elegyedő zsíroldószerek jelenlétében. Az 1 328 202 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás szerint az autolizist 0,5-2 óra hosszal, végzik 20-30 °C hőmérsékleten, nátrium-hidroxid vagy ammónia hozzáadása mellett. A 2 106 706 szánni német szövetségi köztársasági közzétételi irat olyan autolizist ír le, amely az enterokináz aktiválásának javítása céljából több mint 7 napig tart, 4 °C-on, sertéspatkóbél (duodenuhi) jelenlétében. A 3 223 594 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 11%-os kitermelést közöl 10 • NF enzimegység mellett, ami a lehetséges enzimkitermelés mintegy 69%-ának felel meg, mivel 100 g veszteség nélkül szárított és zsírtalanított mirigyszövetből általában 20 g 8 • NF minőségű pankreatint lehet nyerni. Az 1 328 202 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás 6-10 • NF minőségű sterilre szűrt pankreatinnak 3,4 súlyszázalékos kitermelését írja, ami a számszerűleg lehetséges enzimkitermelés mindössze 13-21%-ának felel meg. A 2 620 289 és 2 716 719 számú német szövetségi köztársasági nyilvánosságra hozatali irat szerinti ejárás a lipázra nézve teljes enzimkinyerésröl tudósit, mig az amiláz és proteáz kitermelések nyilvánvalóan annyira alacsonyak, hogy itt már nem lehet pankrealinróJ beszélni, hanem csak .lipázban gazdag eiizimkészílmény röl'. Az aktív enzim számszerűleg lehetséges teljes kinyerését tehát nyilvánvalóan még nem érték el. Ugyancsak nincs adat a proteázakLiválódás mértékéről, amelyet az enterokinázakliválással és az enlerokinázaktiválás nélküli proleazaktivilás összehasonlításával határozhatunk meg. Aktiválás nélkül kisebb mint 0,5 FIP enziinegység/ing értékek találhatók. A technika jelenlegi szintjét bemutató leírásban említett NF a National Formulary rövidítése, amit az Amerikai Gyógyszerészeti Társaság (American Pharmaceutical Association) által kiadott hivatalos amerikai gyógyszerkönyv használ. A 13. kiadás (NF XIII) 514. oldalán a pankreatint enzimtartalmú anyagnak Írják le, ami képes arra, hogy a saját súlyának legalább huszonötszörös súlyú burgonyakeményitöt oldható szénhidrátokká átalalakítson, és a saját súlyának legalább huszonötszörös súlyú kazeint proteolizáljón. Az ennél nagyobb emésztöképességű pankreatiril a megfelelő szorzófaktorral látjuk el. így például négyszeres NF (vagy 4 • NF) olyan pankreatint jelöl, amiben annyi amiláz, proteáz és lipáz van, hogy ebből a pankreatinból 1 g (négyszer huszonötszörös súlyú, azaz) 100 g megfelelő szubsztrátum (keményítő, kazein, olívaolaj) átalakulását katalizálni tudja. A .Fédération Internationale Pharmaceutique" csúcsszövetség alatt működő .Comission on Pharmaceutical Enzymes' adja meg a FlP-egység definícióját a .Pharmaceutical Enzymes' című monográfiájában (R. Ruyssen és A. Lauwers, 1978, Scientific Publishing Company, Gent (Belgium). A 22. oldalon találjuk az általános meghatározást, miszerint 1 FlP-enzimegységü készítmény, jól definiált külső körülmények között 1 mikromolnyi illetve 1 mik roek vivalensnvi szubsztrátumnak 1 perc alatt történő átalakulását katalizálja, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3