196425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás primicin komponenseinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
11 196425 12 Ily módon az 1., 2. és 2/a. példában megadott primicin-komponenseket szulfát-só formájában kapjuk. 5. példa Primicin-komponens sóinak előállítása A 3. vagy 4. példa szerint kapott primicin-komponens szulfát-sókból a T/40808 számon közzétett magyar szabadalmi leírásban ismertetett eljárással a szulfáttól eltérő egyéb sókat állítunk elő, báriumsók hozzáadásával. Ily módon az 1., 2. és 2/a példában megadott primicin-komponensek szulfáttól eltérő sóit kapjuk, például formiát-, oxalát-, benzoát-, tozilát-, perklorát-, klorid-, stb. só formájában. 6. példa Primicin anyagkeverék elválasztása vékonyrétegkromatográfiás módszernél Szilárd hordozó: szilikagél készréteg, Whatman PLK5F 20 x 20 cm, 1 mm rétegvastagság. Kiindulási anyag-minta: 1 ml 1%-os koncentrációjú primicin-acetát oldat oldószer: n-butanol-etanol-viz = 1 : : 1 : 2 térfogatarányú elegye Futtató oldószerrendszer: kloroform-metanol-hangyasav-viz-n-butanol-formaldehid = 160 : 53 : 6 : 9 : : 3 : 3 térfogatarányú elegye A fent jelzett szilikagél rétegre állandó meleg levegővel történő szárítás során felvisszük a mintát. A felvitel 18 cm-es startcsikra történik. A futtatásra előkészített lapokat a frissen készített futtatóba helyezzük. Az elválasztás szempontjából lényeges, hogy a kifejlesztés telítetlen kamrában kezdődjön. Amikor az oldószerfront a 18 cm-es magasságot elérte, a lapokat kivesszük a kádból. Hideg levegővel eltávolítjuk a maradék oldószert a rétegről (meleg levegő alkalmazásakor az anyag károsodást szenved). Három órai szárítás után a lemezek jobb és bal szélén 2,5 cm-es csikót levágunk. A levágott széleket foszformolibdénsavva) előhívjuk. A komponensek sárgászöld háttér mellett barnásszürke színnel jelennek meg. A kijelölt kromatogramm alapján az egyes komponenseket tartalmazó zónafrakciókat lekaparjuk. A lekapart anyagot kis térfogatú oszlopba töltjük, majd klor'oform-metanol-ecetsav-víz = 9 : 6 : 3 : 4 arányú elegyének alsó fázisával oldjuk ki az egyes komponenseket. A kapott oldatokat vákuumban bepároljuk és a maradékot éterben eldörzsöljük. A nem oldódó szilárd anyagot szűrjük, majd 70 °C-on vákuumban tömegállandóságig szárítjuk. 10 db kromatográfiás lapról az alábbi mennyiségű anyagok nyerhetők, acetát-só formájában: chinopricin 43 mg (op = 163-164 °C) midopricin 4 mg (op = 168-169 °C) metipricin 6 mg (op = 164-165 °C) oxipricin 14 mg (op = 163-164 °C) oximipricin 1,6 mg (op = 167-168 °C) oxhnetipricin 1,2 mg (op = 164-165 °C) hidropricin 10 mg (op = 161-162 °C) himipricin 0,8 mg (op = 165-166 °C) himetipricin 1,5 mg (op = 161-162 °C) 7. példa Primicin anyagkeverék elválasztása VEK-s módszerrel, fémsóval impregnált szilikagél készrétegen 20 x 20 cm-es méretű Whatman PLK5F 1 mm rétegvastagságú lemezeket fokozatosan 10%-os vizes ezüstnitrát oldatba merítünk. Ügyelünk arra, hogy a felületen adszorbeálódott levegő folyamatosan eltávozhasson. A lemezeket 10 percig az oldatban tartjuk, majd függőleges helyzetben, fénytől elzártan szobahőmérsékleten megszárítjuk. A réteg végső aktiválását 120 °C-on történő izzítással érjük el. Izzítás előtt minden lapot gondosan alufóliába csomagolunk. A fenti módon elkészített lapokra 1 ml 1%-os primicin-acetát oldatot viszünk fel. (a mintát n-butanol-etanol-viz =1:1:2 térfogatarányú elegyében oldjuk.) A felvitel során meleg levegővel szárítjuk a 18 cm széles start-csíkot. A kifejlesztésre előkészített lapokat 15 tömegrész monoklórecetsavat tartalmazó kloroform-metanol-víz-formaldehid-n-butanol = 125 : 53 : : 9 : 3 : 3 térfogatarányú térfogatelegybe tesszük. Amikor az oldószerfront a 18 cm-es magasságot elérte, a lapokat kivesszük és hideg levegőáramban oldószermentesre szárítjuk. A kromatográfiás lemezek jobb és bal oldalán 2,5 cm-es csíkokat vágunk le, melyeket etanolban oldott koncentrált kénsavval lefújunk. A csíkok végső előhívását 120 °C-oi történő melegítéssel érjük el. A kijelölt zórafrukciókat lekaparjuk. A lekapart szilikagélt kis térfogatú oszlopba töltjük, majd kloroform-metanol-ecetsav-víz = 9 : 6 : 3 : 4 arányú elegyének elsó fázisával oldjuk ki a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
