196421. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amikacin szelektív szintézisére
8 196121 9 talmazza a várt vegyületet az alkalmazott standard körülmények között; az utóbbiakat a kísérleti rész egy példájában ismertetjük. Az egyetlen nagy mennyiségben levő szennyező anyag a kanamicin A, amely nemcsak hogy nem zavarja a fötermék szeparálását az ioncserélő kromatográfiás oszlopon (minthogy retenciós ideje az oszlopon kisebb az amikacinénál), de koncentrálás után izolálható; 80% kitermeléssel képződik amikacin a kanamicin A-ra vonatkoztatva, mely utóbbi a szintézis legköltségesebb reagense. A következő példák részletesebben ismertetik a találmány szerinti eljárást, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák. 1. példa 5,2 g (5,87 millimól) 85% titerü 3,6’-di-N-benzil-oxi-karbonil-kanamicin A-t és 3,9 g vízmentes cink-acetátot (21,3 millimól) dimetil-szulfoxid (25 ml) és víz (70 ml) elegyében oldunk. Szobahőmérsékleten 24 óráig keverjük, majd hozzáadjuk a 4-benzil-oxi-karbonil-amino-2-hidroxi-vajsav N-hidroxi-szukcinimiddel képezett észterét metilén-kloridban oldva (3,28 g 140 ml-ben). Izolálás céljából 5 órai keverés után a metilén-kloridot lepároljuk és a maradékot 20 °C-on víz (125 ml) és tömény ammóniaoldat (25 ml) elegyével perkoláljuk. Szűrés, mosás és 45 °C-os kályhában való szárítás után 6,7 g fehér szilárd anyagként 45% tisztaságú 3,6’-di-N-benzil-oxi-karbonil-l-N-[L-(-)“í-benzil-oxi-karbonil-amino-oC-hidroxi-butiril]-kanaraicin - A-t és 16,8% 3,6’-di-N—benzil-oxi-karbonil-kanamicin - A kiindulási anyagot kapunk. A kitermelés a sztöchiometrikus érték ,51,4%-a. A kapott terméket 40 ml viz/aceton elegyben szuszpendáljuk, hozzáadunk 2 ml ecetsavat, majd 5% Pd/C katalizátor jelenlétében 5 bar nyomású hidrogéngázzal kezelve hidrogénezzük. Szobahőmérsékleten 2 órán át tartó kezelés után a katalizátort kiszűrjük és az oldatból az acetont elpárologtatjuk, a kapott vizes oldatot - amely 6,51 mg/ml amikacint, 0,4 mg/ml kanamicint, 0,21 mg/ml BE-Kll-et és 1,83 mg/ml L-HABA-val az N-l és N-3" helyzetben diacilezett terméket tartalmaz - zeolit típusú, gyengén savas ion cserélő gyantán abszorbeáljuk, majd ammóniaoldattal (1-195 N egyensúlyi gradiens) eluáljuk. Az amikacint tartalmazó frakciókat egyesítjük és vákuumban bepároljuk addig amíg az ammónia eltávozik és az amikacin végső koncentrációja körülbelül 20%. Szobahőmérsékletre való lehűlés után a pH-t 50%-os kénsavval 2-ra beállítjuk, ezután szintelenító szénnel kezeljük és 10 térfogat metanolt adunk hozzá. A képződött kristályos anyagot vákuum alatt szűrjük és kis mennyiségű metanollal- mossuk. Vákuumban 50 °C-on 24 órán ét szárítjuk és így 3,8 g amikacin szulfátot kapunk 0,1% metanol- és 8,9% viz-tartalommal (mikrobiológiai titer 670 ug/mg). [dC] = 78° (C = 1, HzO); szulfát 24,1% szulfát hamu = 0,2%; pH = C = = 1, H2O) = 3,1. Az összes szennyezés (BBK11, kanamicin) mennyisége kevesebb mint 1%. 2. példa 5,2 g 85% titerű 3,6'-di-N-benzil-oxi-karbonil-kanamicin A-t (5,87 millimól) 20 ml metanolban szuszpendálunk; vízben (80 ml) oldott cink-acetátot (3,9 g vízmentes termék) adunk gyorsan hozzá. Szobahőmérsékleten való 2 órás keverés után egy adagban hozzáadjuk az L-(-)-4-benziloxi-karbonil-amino-2-hidroxi-vajsav N-hidroxi-szukcinimiddel képezett észterét (3,28 g; 9,35 millimól) 100 ml metilén-kloridban oldva. A keveréket szobahőmérsékleten éjszakán át állni hagyjuk, majd a metilén-klorid lepárlása után vízzel és ammóniaoldattal (5%, 150 ml) hígítjuk. A szilárd anyag leszűrése és szárítása után 6,5 g 3,6’-N-di-benzil-oxi-karbonil-l-N-[L-(-)-^-benzil-oxi-karbonil-amino-oC-hidroxi-butiril]-kanamicin A-t (49,8%) kapunk, mely a sztöchiometrikus kitermelés 57%-a. A még jelenlévő kiindulási anyag az elválasztott termék 17%-ának felel meg, ami a sztöchiometrikus érték 25%-a. Az acilezés után kapott terméket 100 ml vízben szuszpendáljuk. 3,5 g 5% Pd/C katalizátort, majd 20 ml vízben oldott 7 ml hangyasavat adunk hozzá. Éjszakai keverés után az elegyet leszűrjük és a szilárd maradékot vízzel mossuk. A kapott oldat (223 ml) össztétele a következő: mg/ml relatív X Amikacin 8.2 63.3 BB-K29 0.3 2.3 BB-K11 0.3 2.3 Diacilezett* 0.69 5.3 Kanamicin A 3.46 26.7 *Az N-l és N-3" helyzetben az L-HABA maradékával acilezett termék, melyben az amikacin relatív tisztasága a homológjaira vonatkoztatva (kanamicinon kívül) nagyobb 90%-nál. Az oldat pH-ját 7-re állítjuk be, majd ammóniaformában levő, gyengén savas ioncserélő gyantával megtöltött oszlopon szivárogtatjuk át. Ammóniaoldattal eluláljuk, és a kanamicin A-t és az amikacint tartalmazó frakciókat szeparáljuk. A kanamicin A-t tartalmazó frakciókat egyesítjük és 20% töménységig bepároljuk. Metanollal való kicsapás után 1,1 g kanamicin-szulfát válik ki az oldatból. Az amikacint tartalmazó frakciókat 20% töménységig bepároljuk, majd 50% kén-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
