196263. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eljárás és készítmény
1 196 263 2 bumint (Miles Laboratories Ltd.) adunk hozzá 1 t/tf% koncentrációig, c) Polivalens Setcx előállítása Három különböző színű latex mindegyikét egyegy különböző spéci fitású antitesttel érzékenyít- 5 jük; például a vörös színű latcxet Salmonella A-szérumcsoport antitesttel, a kék latexet B szérumcsoport antitesttel és a zöld latexet C-szérumcsoport antitesttel vonjuk be, majd az így adaptált háromféle színű latexet egyenlő arányban összeke- 10 verjük egymással. A kapott latex-keverék színe bama. 2. példa 15 A polivalens latex alkalmazása a vizsgálathoz A latex-agglutináciős tesztet fehér kártyákon (Syfacard-R, Wellcome Diagnostics Ltd.) folytatjuk le. A vizsgálati minta és a polivalens latex 20 egyenlő térfogatú (rendszerint 20 p) adagjait egy 2 cin átmérőjű körön keverjük össze a fehér lapon. A lapot azután 3 percig lengetjük, majd megvizsgáljuk a mintát, hogy bekövetkezett-e agglutináció. Az agglutinátum színét (például vörös, kék 25 vagy zöld) megállapítjuk és ugyanakkor látjuk, hogy az agglutinálatlan latex színe barnáról a nem agglutinált szuszpenzióban maradó kétféle részecske színének kombinációjára változik. 30 A) Baktérium-kolónia azonosítása Egy szilárd táptalajon kifejlődött baktérium-kolóniák közül egyetlen kolóniát kiemelünk és ezt 200 pl 0,85%-os nátrium-klorid-oldatban emuige- 35 áljuk. Az így kapott bakíérium-szuszpenziót összekeverjük a fentebb leírt polivalens latex-szel. Antigén 1. Csak sóoldat 2. A-szérumcsoportbcli Salmonella, pl. S. paratyphi A 3. B-szérumcsoporíbeli Sailmonella,pí. S.tiphimurium 4. C-szérumcsoportbcli Salmonella, pl. S. newport Eredmény 40 Barna színű homogén oldat Vörös agglutinátum, türkizkék oldatban 45 Kék agglutinátum narancsszínű oldatban Zöld agglutinátum, 50 bíborszínű oldatban 3. példa Készlet és eljárás Salmonella kimutatására 1) Vizsgálati készlet A vizsgálat céljaira szolgáló készlet az alábbiakból áll: a) Latex-reagens: Csepegtetőpalack, amely polisztirol-latex részecskék tartósítószert tartalmazó pnffcroldattal készített szürkésbama szuszpenzióját tartalmazza; a szuszpenzió nyúl-antitestekkel bevont egyedi vörös, kék észöld latex keverékéből áll, a különböző színű latexek az alábbi spécificitásűak: vörös latex: Salmonella B szerocsoport, kék latex: Salmonella C szerocsoport, zöld latex: Salmonella D[ szerocsoport. b) pozitív kontroli-antigének, c) egyszeri felhasználásra való szuszenzió-kémcsövek, d) egyszeri felhasználásra való mintavevő pálcák, e) egyszeri felhasználásra való minta-adagolók, f) egyszeri felhasználásra való reakció-lapok; szükség van még az alábbi szokásos kellékekre is: g) steril sóoldat, h) lapos-ágyas rotátor (pálya-átmérő 32 mm, forgási sebesség: percenként 150 fordulat). 2. Vizsgálati módszer telepek azonosítására. a) 200 pl sóoldatot adagolunk a szuszpenziókámcsőbe. b) Egy mintavevő pálca alkalmazásával egy vagy két átlagos méretű feltételezett Salmonella telepet veszünk a kultúra-lemezről és a baktériumokat gondosan emulgeáljuk a sóoldatban. c) A latex-reagenst néhány másodperces rázással újra szuszpendáljuk és 30 fd-t adagolunk a reakció-lap egyik körébe. d) Egy minta-adagolóval a baktérium-szuszpenzió egy szabadon lehulló cseppjét visszük a körben levő baktérium-szuszpenzióra. e) Egy mintavevő pálcával a körben Jevó anyagot összekeverjük és szétterítjük a kör egész területére. f) A lapot 2 percnyi időtartamra egy percenként 150 fordulatra beállított lapos-ágyas rotáíorra helyezzük. A rotátort azután leállítjuk és a lapot a rotátorról való levevés nélkül megvizsgáljuk, hogy mutatkozik-e agglutináció. A lapot a normális olvasási távolságról kel! szemlélni, nagyítólencse használata nélkül. B) Antigén kimutatása biológiai folyadékokban Agyhártyagyulladásban szenvedő betcgtól vett spinális folyadékot vizsgálunk a fentebb leírt módszerrel, a Salmonella polivalens latex alkalmazásával. A vörös részecskék bekövetkező agglutináci- 60 ója a B szérum csoportbeli Salmonella mikroorganizmusokból származó antigén jelenlétét mutatja a vizsgált spinális folyadékban. A fertőzetlen személytől vett és kontrollként vizsgált spinális folyadék nem okozott aggiutinációt a latexben. gc 3) Az eredmények értékelése Az agglutinált latcx-részecske csomók színes, a háttér bekövetkező kontrasztáló színváltozásával együtt mutatja Salmonella organizmusoknak a mintában való jelenlétét, és ugyanakkor módot ad ezek szerocsoportjának az azonosítására, az alábbiak szerint: A csomók A háttér színe Szerocsoport vörös türkizkék B kék narancs C zöld bíbor D 6
