196263. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eljárás és készítmény
1 196 263 2 A íalálmány tárgya agglutinációs eljárás és ehhez való diagnosztikai vizsgálati készlet ligandok kimutatására, Az immunogének és antitestek agglutinálóján alapuló diagnosztikai vizsgálati módszerek — amelyekben vagy az immunogént, vagy az antitestet kötik egy szilárd fázishoz -- jói ismertek az immunodiagnosztika terén. így például a 3088875 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás olyan eljárást ismertet, amelyben antigénnel bevont mikrogolyócskákat kevernek össze a vizsgálandó mintával: ha a minta az illető antigénre reagáló antitesteket tartalmaz, akkor ezek az antitestek az antigénhez kötődnek és ezáltal a mikrogoiyócskák látható aggluíinációját vagyaggregációját idézik elő. Az agglutinációs folyamat vizuális felismerésének elősegítésére színes szilárd fázist vagy szilárd részecskéket alkalmaztak az ilyen vizsgálatoknál, így például olyan teszt-készletek vannak kereskedelmi forgalomban a béta-hemolitikus Stteplococcusok csoportjának kimutására, amelyekben a reagensek szilárd elölt, pirosra vagy kékre festett Staphylococcus aureus sejtek szuszpenziója. Van továbbá kereskedelmi forgalomban olyan tesztkészlet is amely négy különálló reagenst tartalmaz és ezek mindegyike más-más színű latex-részccskéket tartalmaz a Streptococcusok, A, B, C és G csoportjának kimutatására. Mindegyik teszt-reagens külön színnel való megjelölése kiküszöböli a például helytelen címkézés által előidézett tévedések lehetőségét. A 44Í9453 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadaimi leírásban oly latex-agglutinációs tesztet ismertettek, amelyben a teszt-reagens egy bizonyos színűre festett és antigénnel vagy antitesttel bevont latex-részecskéket és vízben oldódó, nemlaíex jellegű, más színű színezéket abszorbeáló polimer-részecskéket tartalmazott. Agglutinációs bekövetekezése esetén az aggregátum színe és az oldat elférő háttér-színe közötti eltérés elősegítette a vizuális megállapítást. Az olyan diagnosztikai módszereket, mint a latex-agglutinációs teszt, általában a valamely betegségben szenvedő páciens által mutator klinikai tünetekre alapított kezdeti diagnózis megerősítésére alkalmazzák. Oly esetekben, amikor a betegséget igen jól megkülönböztethető tünetek jellemzik, a kórokozó (például baktérium vagy vírus) jelenlétének megerősítésére viszonylag kevés teszt szükséges. Olyan betegségek esetén azonban, amikor a tünetek számos különféle lehetséges kórokozó bármelyikének tulajdoníthatók, nyilván sok időt és fáradtságot igényelne teszteket végezni valamennyi lehetséges kórokozó esetleges jelenlétének vizsgálatára és ehhez jelentős mennyiségű mintát kellene a betegtől vermi. Ez kitlönscn olyan esetekben okoz problémát, amikor csak kismenynyiségű biológiai anyagmintát lehet venni a betegtől, mint például újszülöttek cerebro-spinális folyadékával végzendő tesztek esetében. Ismeretesek oly heterogén specifikus kötési tesztek, amelyekben többféle ligandumot leltet egyidejűleg meghatározni, egyetlen vizsgálatban, ami által az elvégzendő tesztek száma lényegesen csekken. Az ilyen kombinált teszteket (ve.: 2054466 A, sz. közzétett nagy-britanniai szabao dalmi bejelentés) különösen előnyősnek tartják szkrin-vizsgálatok végzésére, például a kongenitáli:; (veleszületett) fejlődési rendellenességeket előidéző vírusok és egyéb antigének, mint Rubella, Cytomegalovirus és Herpes simplex vírus elleni immunitás diagnosztikai vizsgálatok esetén. Kombinált vizsgálattal a páciens két vagy több ilyen antigénnel szembeni immunitása lenne kimutatható egyetlen teszttel, valamennyi antigén elleni antitest jelenlétének kimutatása útján. A 2 034 466 A sz. közzétett nagy-britanniai szabadalmi bejelentés leírása ismertet egy ilyen vizsgálati módszert, amely szerint a ligandumok megkülönböztetését több differenciálisán elkülöníthető szilárd fázis alkalmazásával teszik lehetővé. Ilyen szilárd fázisok például oly módon képezhetők, hogy egy, az egyik immunológiailag aktív anyaggal bevont 1 rmezt egy a másik immunológiailag aktív anyaggal bevont falú edényben helyeznek el. Az immunológiai reakciók megfelelő sorozatának lefolytatása utána Jigandum-immunokémiai komplexek elkülönítése egyszerűen a lemeznek az edényből való kiemelésével történhet. Ismeretesek továbbá olyan kombinált vizsgálati módszerek, amelyekben például különböző specifikus kötőanyagokat egymástól eltérő méretű részecskékhez kötnek (1561042 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás), vagy amelyben mikroszkópiás lton megkülönböztethető rozettákat képeznek a 'igandumból és a kötőanyagból (2122345 sz. közíétett nagy-britanniai szabadalmi bejelentés), vagy amelyben mindegyik specifikus kötőanyagot olyan egymástól megkülönböztethető látex-részecskékhez kötnek, amelyek megkülönböztetését különböző radioaktív anyagokkal való megjelölés vagy különböző, például röngten-fluoreszencia spektroszkópiai úton azonosítható elemek jelenléte teszi lehetővé (4436826 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A 29 43 648 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi közre bocsátási iratban egy specifikus kötési teszt-módszert és ehhez való eszközöket írtak le több különböző ligandumnak egyetlen folyékony vizsgálati mintában történő szimultán meghatározására. Ebben a módszerben minden egyes különböző meghatározandó ligandumnak megfelelően a) egy például radioaktív izotóppal vagy egy enzimmel jelzett kötószert, (a jelzó ugyanaz mindegyik ilyen kötőszemél) és b) egy egységes szilárd fázisú hordozót, egy hozzá kapcsolódó kötószerre) alkalmaznak, mimellctt az említet hordozók úgy vannak elrendezve, hogy elkülöníthetők legyenek egymástól. A vizsgálat lefolytatása során a mintát mind a jelzett kötószerekkel, mind a szilárd fázisú hordozókkal érintkeztetik, majd a hordozókat elkülönítik egymástól és a reakcióelegytől, és külön-külön mérik mindegyik hordozón a jelzőszer mennyiségét, hogy meghatározzák a megfelelő ligandumnak a mintában való jelenlétét illetőleg annak mennyiségét. Az egynél több iigandum egymás melletti meghatározására szolgáló fentebb ismeretetett módszerek hátránya azonban, hogy vagy bonyolult készülékek alkalmazását, vagy különböző típusú szilárd fázisok mechanikai úton történő szétválasztását igényük, vagy pedig nem alkalmazhatók általános módszerként immunogének, antitestek 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
