196242. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagenskombináció mikroorganizmusok azonosítására nukleinsavak sandwich-hidrolizációjával
1 196 242 2 A táblázatban megadott értékeket úgy kaptuk, hogy ugyanígy elvégeztük a hibridizálást minta nélkül, és a2 így kapott reagens-háttér-hibridizálási értékeket levontuk. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás mikrobáknak vagy mikrobacsoportoknak nukleinsavak szilárd hordozón végbemenő sandwich hibridizálásán alapuló azonosítására, melynek során két különböző, közös szekvenciával nem rendelkező, de az adott mikroba vagy mikrobacsoport genómájában előnyösen egymáshoz közel elhelyezkedő nukleinsavreagenst alkalmazunk az adott mintában jelenlevő mikroba vagy mikrobacsoport azonosítására, amely nukleinsavreagensek egyike egy szilárd hordozóhoz kötött, egyszálú nukleinsavfragmentum, a másik pedig egy megfelelő jelzéssel ellátott, egyszálú nukleinsavfragmentum, azzal jellemezve, hogy a különböző mikrobák vagy mikrobacsoportok egyidejű azonosítására nukleinsavreagensek sorozatát hozzuk érintkezésbe az osztatlan mintában levő, összes mikrobák és mikrobacsoportok nukleinsavaival úgy, hogy a mintából származó nukleinsavakat előbb ismert módon egyszálűvá alakítjuk, majd a szilárd hordozóhoz kötött, komplementér nukleinsav-fragmentumokka! hibridizáljuk, ugyanakkor a hordozóhoz kötött hibrideket a minta nukleinsavainak és a jelzett nukleinsav-fragmentumoknak az összeforrasztása következtében jelzettekké tesszük, majd a hordozóhoz kötődő jelzés erősségét megmérjük, 2. Reagenskombinációk sorozata, az 1. igénypont szerinti eljárás megvalósítására azzal jellemezve, hogy minden egyes azonosítandó mikroba vagy mikfobacsoport számára két nukleinsavreagenst tartalmaz, az előnyösen egymáshoz közeli helyekről származó egyszálú, csoport vagy fajspecifikus nukleinsavfragmentumok egyike szilárd hordozóhoz van kötve, míg a másik megfelelő jelzéssel van ellátva. 3. A 2. igénypont szerinti regenskombinációk sorozata, azzal jellemezve, hogy adenovirus azonosítására szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavr-eagensként az adenovirus rekombináns AD2—DpBR322 plazmidját, jelzett nukleinsavreagensként pedig az adenovirus Adj—BamHI C- fragmentumát tartalmazza. 4. A 2. igénypont szerinti reagenskombinációk sorozata, azzal jellemezve, hogy Sémiiké Forest 5 vírus azonosítására szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavreagensként a pKTH312 plazmid EcoRI— Xhol A-fragmentumát, jelzett nukleinsavreagensként pedig a pKTH312 plazmid EcoRI—Xhol B-fragmentumát tartalmazza. 10 5, A 2. igénypont szerinti reagenskombinációk sorozata, azzal jellemezve, hogy SV40 vírus azonosítására szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavreagensként az SV40 vírus PstI B-fragmentumát, jelzett nukleinsavreagensként pedig az SV40 vírus 15 PstI A-fragmentumát tartalmazza. 6. A 2. igénypont szerinti reagenskombinációk sorozata, azzal jellemezve, hogy Bacillus amyloilquefaciens azonosítására szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavreagensként a Baccillus amyloliqu- 20 efaciens pKTHIO plazmid a-amiláz génjének EcoRI-BamHI fragmentumát, jelzett nukleinsavreagensként pedig a Bacillus amyloliquefaciens pKTHIO plazmid a-amiláz génjének Clal-EcoRI fragmentumát tartalmazza. 25 7. A 2. igénypont szerinti reagemskombináctók . sorozata, azzal jellemezve, hogy E. coll azonosítására szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavreagensként pKTH45 plazmidot, és jelzett nukleinsavreágensként mKTH1207 rekombinációs fágot tartal- 30 máz. 8. A 2., 3., 5. és 6. igénypontok bármelyike szerinti reagenskombinációk sorozata, azzal jellemezve, hogy egy ugyanazon — különöző mikrobákból eredó nukleinsavakat tartalmazó — mintá- 35 ból származó különböző mikrobák, vírusok és baktériumok, úgy mint adenovirus, SV40 vírus és Bacillus amyíoliquefaciens azonosítására és megkülönböztetésére a kombináció szilárd hordozóhoz kötött nukleinsavregensként az adenovirus 40 Ad2—DpBR322 rekombináns plazmidját, az SV4Q v írus PstI B-fragmentumát és a Bacillus amyloliquefaciens pKTHIO plazmid a-amiláz génjének EcoRI-BamHI fragmentumát, jelzett nukleinsavreagensekként pedig az adenovirus Adj—BamHI 45 C-fragmentumát, az SV40 vírus PstI A-fragmentunát és a Bacillus amyloliquefaciens pKTHIO plazmid a-amiláz génjének Clal-EcoRI fragmentumát tartalmazza. ábra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivatal A kiadásért felel: Himer Zoltán osztályvezető Megjelent a Műszaki Könyvkiadó gondozásában 89-598 —Szegedi Nyomda
